Трипсин как индуктор агрегации тромбоцитов в эксперименте in vitro и предположительные механизмы её реализации

Обоснование. Сериновые протеазы являются наиболее многочисленным каталитическим типом протеолитических ферментов и выполняют в организме разнообразные функции. Они участвуют в процессе пищеварения, являются факторами свёртывания крови, компонентами комплемента и калликреин-кининовой системы и т.д. Наиболее изученным представителем сериновых протеаз является трипсин. Известно, что при некоторых патологических процессах и состояниях, таких как панкреатит и панкреонекроз, трипсин попадает в системный кровоток. Это чревато развитием тромбозов и тромбоэмболий, однако механизмы этих нарушений на сегодняшний день изучены недостаточно. Одним из механизмов, предположительно, может быть трипсин-опосредованная активация тромбоцитов с последующей их агрегацией.

Цель исследования. Изучить возможность трипсина индуцировать агрегацию тромбоцитов in vitro.

Методы. Эксперименты проведены на богатой тромбоцитами плазме, полученной от 22 относительно здоровых добровольцев. Методом оптической агрегатометрии исследовали агрегацию тромбоцитов трипсином в конечных концентрациях 0,5, 1, 2,5, 5 и 10 μМ. На следующем этапе регистрировали трипсин-индуцированную агрегацию тромбоцитов в дефицитной по протромбину плазме.

Результаты. Трипсин способен индуцировать агрегацию тромбоцитов in vitro. Минимальный эффект был отмечен при добавлении 2,5 μМ. Внесение в тромбоцитарную плазму 5 и 10 μМ трипсина индуцировало выраженную и необратимую агрегацию тромбоцитов. Трипсин-индуцированная агрегация реализуется как в гепаринизированной, так и в дефицитной по факторам протромбинового комплекса плазме.

Выводы. В ходе исследования выявлены проагрегантные эффекты трипсина, которые являются самостоятельными и могут быть реализованы без участия тромбина.

1. Famutimi OG, et al. Trypsin, chymotrypsin and elastase in health and disease. Future Journal of Pharmaceutical Sciences. 2024; 10: 126. doi: 10.1186/s43094-024-00709-y

2. Зинкевич О.Д., Сафина Н.А., Чикаев В.Ф., и др. Протеолитические ферменты мочи и сыворотки крови у больных острым панкреатитом. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2017; (11): 86–91.

3. Mousseau CB, et al. Quenching trypsin is unnecessary in filter-based bottom-up proteomics. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 2024; 35(8): 2028–2031. doi: 10.1021/jasms.4c00143

4. Liu SH, et al. The expression and significance of protease activated receptor 2 in ovarian epithelial carcinoma. Zhonghua Zhong liu za zhi [Chinese Journal of Oncology]. 2023; 45(1): 64–73. doi: 10.3760/cma.j.cn112152-20211214-00928

5. Koistinen H, et al. The roles of proteases in prostate cancer. IUBMB life. 2023; 75(6): 493–513. doi: 10.1002/iub.2700

6. Strong AA, Buzza MS, Antalis TM. Protease-Activated Receptor-2 Promotes Metastasis: An Emerging Therapeutic Target. Molecular Cancer Research. 2026; 24(4): 207– 220. doi: 10.1158/1541-7786.mcr-25-0788

7. Vetvicka D, et al. Proteinase-activated receptor 2: springboard of tumors. Anticancer Research. 2024; 44(1): 1–12. doi: 10.21873/anticanres.16782

8. Anitua E, Prado R, Padilla S. Evolutionary insight into immunothrombosis as a healing mechanism. International Journal of Molecular Sciences. 2022; 23(15): 8346. doi: 10.3390/ijms23158346

9. Кузник Б.И., Ройтман Е.В., Цыбиков Н.Н. и др. Полипотентные механизмы регуляции системы гемостаза и тромбообразования при COVID-19. Тромбоз, гемостаз и реология. 2023; 2: 67–89.

10. Peach CJ, et al. Protease-activated receptors in health and disease. Physiological Reviews. 2023; 103(1): 717–785. doi: 10.1152/physrev.00044.2021

11. Kardeby C, et al. Heparin and heparin proteoglycan-mimetics activate platelets via PEAR1 and PI3Kβ. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2023; 21(1): 101–116. doi: 10.1016/j.jtha.2022.10.008

12. Zhao P, Metcalf M, Bunnett NW. Biased Signaling of Protease-Activated Receptors. Front. Endocrinol. 2014; 5: 67. doi: 10.3389/fendo.2014.00067

13. Webb EM, Seymour K, Hamm HE. Trypsin Activates Human Platelets via Proteolytic Cleavage of Protease-Activated Receptor 4. Thrombosis and Haemostasis. 2025. doi: 10.1055/a-2747-9083