ПОДХОДЫ К РАЗРАБОТКЕ БИОАНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСТАБИЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

В статье приведены подходы к разработке биоаналитических методик для определения веществ, содержащих в структуре нестабильные функциональные группы. Процессы окисления и гидролиза являются основными причинами разложения веществ в биологических жидкостях. В качестве примера легкоокисляющихся соединений были выбраны молекулы, содержащие в структуре фенольные гидроксилы, в качестве примера легкоокисляющихся соединений – глюкурониды лекарственных веществ. Для измерения концентраций микофеноловой кислоты, содержащей в структуре один фенольный гидроксил и в процессе метаболизма образующей глюкурониды, в плазме крови использовались методы высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим и тандемным масс-спектрометрическим детектированием. Концентрации метилдопы, содержащей в структуре два фенольных гидроксила, в плазме измерялись с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием в диапазоне 0,02–3,00 мкг/мл. Определение деметилированной мебевериновой кислоты, содержащей в структуре один фенольный гидроксил и метаболизирующейся с образованием фенольного глюкуронида, осуществляли в диапазоне 10–2000 нг/мл совместно с мебевериновой кислотой. В начале разработки методик была изучено влияние фрагментации глюкуронидов в источнике ионов на количественное определение изучаемых веществ. Затем был произведён выбор антикоагулянта на основании изучения краткосрочной стабильности и стабильности при замораживании/размораживании аналитов, а также обратной конверсии их глюкуроновых коньюгатов. Для стабилизации метилдопы была использована комбинация антикоагулянта К3ЭДТА и раствора антиоксиданта, содержащего смесь аскорбиновой кислоты, натрия сульфита и натрия гидрокарбоната в концентрациях 5,0 %, 0,2 % и 2,4 % соответственно.

нестабильность, обратная конверсия, плазма, микофеноловая кислота, метилдопа, деметилированая мебевериновая кислота

1. Об утверждении Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза: Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 85. – 2016. – Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document/456026107.

2. Руководство по экспертизе лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. – М.: ПолиграфПлюс, 2014. – Т. 1. – С. 328.

3. Хохлов А.Л., Рыска М., Кукес В.Г., Писачкова М., Печена М., Яворский А.Н., Шитов Л.Н., Джурко Ю.А., Ромадоновский Д.П., Шитова А.М., Чудова Н.В., Цызман Л.Г., Лилеева Е.Г., Хохлов А.А., Поздняков Н.О., Мирошников А.Е., Воронина Е.А., Рыбачкова Ю.В., Мануилов Д.М., Зимина Н.В., Яичков И.И. Теоретические и практические основы проведения исследований воспроизведённых лекарственных препаратов. – Москва – Ярославль – Прага, 2017. – 227 с.

4. Хохлов А.Л., Джурко Ю.А., Kubes V., Шитов Л.Н., Яичков И.И., Шитова А.М. Методика количественного определения метилдопы в плазме крови человека // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. – 2017. – Т. 63, № 3. – С. 105–108.

5. Хохлов А.Л., Яичков И.И., Шитова А.М., Шитов Л.Н., Джурко Ю.А. Исследование сравнительной фармакокинетики таблетированных форм микофеноловой кислоты // Фармакокинетика и фармакодинамика. – 2016. – № 4. – С. 3–8.

6. Яичков И.И., Хохлов А.Л., Джурко Ю.А., Шитов Л.Н., Трубников А.А. Способы стабилизации лекарственных веществ и их метаболитов в биологических жидкостях при биоаналитических исследованиях (обзор) // Разработка и регистрация лекарственных средств. – 2017. – № 2. – С. 160–164.

7. Almeida S, Filipe A, Neves R, Spínola AC, Tanguay M, Ortuño J, Farré A, Torns A. (2010). Mycophenolate mofetil 500-mg tablet under fasting conditions: single-dose, randomized-sequence, open-label, four-way replicate crossover, bioequivalence study in healthy subjects. Clin Therap, 32 (3), 556-574. DOI: 10.1016/j. clinthera.2010.03.008

8. Benoit-Biancamano MO, Caron P, Levesque E, Delage R, Couture F, Guillemette C. (2007). Sensitive high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for quantitative analysis of mycophenolic acid and its glucuronide metabolites in human plasma and urine. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 858, 159-167. DOI: 10.1016/j. jchromb.2007.08.023

9. Brandhorst G, Streit F, Goetze S, Oellerich M, Armstrong VW. (2006). Quantification by liquid chromatography tandem mass spectrometry of mycophenolic acid and its phenol and acyl glucuronide metabolites. Clin Chem, 52 (10), 1962-1964. DOI: 10.1373/clinchem.2006.074336

10. Dell D. (2004). Labile metabolites. Chromatogr Suppl, 59, 139-148. DOI: 10.1365/s10337-003-0169-5

11. Elbarty FA, Shoker AS. (2007). Liquid chromatographic determination of mycophenolic acid and its metabolites in human kidney transplant plasma: Pharmacokinetic application. J Chromatogr B, 859 (2), 276-281. DOI: 10.1016/j.jchromb.2007.09.036

12. Elliott S, Burgess V. (2006). Investigative implications of the instability and metabolism of mebeverine. J Anal Toxicol, 30 (2), 91-97.

13. European Medicines Agency. Committee for Medical Products of Human Use. (2010). Guideline on bioanalytical method validation. – Available at: www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_ guideline/2011/08/WC500109686.pdf.

14. Food and Drug administration. (2013). Guidance for industry. Bioanalytical method validation. Available at: http://www.fda.gov/downloads/drugs/ guidancecomplianceregulatoryinformation/ guidances/ucm368107.

15. Heinig K, Bucheli F, Hartenbach R, Gajate-Perez A. (2010). Determination of mycophenolic acid and its phenyl glucuronide in human plasma, ultrafiltrate, blood, DBS and dried plasma spots. Bioanal, 2 (8), 1423-1435. DOI: 10.4155/bio.10.99

16. Hilhorst M, Van Amsterdam P, Heinig K, Swanziger E, Abbott R. (2015). Stabilization of clinical samples collected for quantitative bioanalysis – a reflection from the European Bioanalysis Forum. Bioanal, 7 (3), 333-343. DOI: 10.4155/bio.14.290

17. Khatri CA, Phanikumar ChV, Jayaveera K. (2012). Development and validation of bioanalytical method for simultaneous quantification of veratric acid, mebeverine acid and desmethyl mebeverine acid in human EDTA plasma by using LC-MS/MS. Pharm Chem J, 4 (6), 11-18.

18. Khokhlov AL, Dzhurko YA, Yaichkov II, Shitov LN, Shitova AM, Miroshnikov AE, Khozova LA. (2017). The rapid and sensitive HPLC-MS/MS-Method of determination of mebeverine metabolites in human plasma. Mathews J Pharm Sci, 1 (2), 010. Available at: mathewsopenaccess. com/PDF/pharmaceutical-science/M_J_Phar_2_1_010.pdf.

19. Khokhlov AL, Yaichkov II, Dzhurko YA, Shitov LN. (2017). Methodical approaches to bioassay of phenolic hydroxylenes contain substances. Med News North Cauc, 12 (3), 294-299. DOI: 10.14300/MNNC.2017.12088

20. Kuhn J, Götting C, Kleesiek K. (2009). Sample cleanup-free determination of mycophenolic acid and its glucuronide in serum and plasma using the novel technology of ultra-performance liquid chromatography – electrospray ionization tandem mass spectrometry. Talanta, 80 (5), 1894-1898. DOI: 10.1016/j.talanta.2009.10.040

21. Kuhn J, Prante C, Kleesiek K, Götting C. (2009). Measurement of mycophenolic acid and its glucuronide using a novel rapid liquid chromatography – electrospray ionization tandem mass spectrometry assay. Clin Biochem, 42 (1-2), 83-90. doi: 10.1016/j.clinbiochem.2008.10.004

22. Kristinsson J, Snorradbttir I, Johannsson M. (1994). The metabolism of mebeverine in man: identification of urinary metabolites by gas chromatography/ mass spectrometry. Pharmacol Toxicol, 74 (3), 174-180.

23. Li W, Zhang J, Tse F. (2013). Handbook of LC-MS bioanalysis. New Jersey, 675 p.

24. Li W, Zhang J, Tse F. (2011). Strategies in quantitative LC-MS/MS analysis of unstable small molecules in biological matrices. Biomed Chromatogr,

25. (1-2), 258277. DOI: 10.1002/bmc.1572 25. Liu Q, Jiao Z, Zhong M, Zhang M, Geng F, Zhao H. (2017). Effect of long-term co-administration of com pound glycyrrhizin tablets on the pharmacokinetics of mycophenolic acid in rats. Xenobiotica, 46 (7), 627-633. DOI: 10.3109/00498254.2015.1103386

26. Maddela R, Pilli NR, Maddela S. (2017). A novel and rapid LC–MS/MS assay for the determination of mycophenolate and mycophenolic acid in human plasma. J Young Pharm, 9 (1), 107-114. DOI: 10.5530/jyp.2017.9.20

27. Moskaleva NE, Baranov PA, Mesonzhnik NV, Appolonova SA. (2017). HPLC-MS/MS method for the simultaneous quantification of desmethylmebeverine acid, mebeverine acid and mebeverine alcohol in human plasma along with its application to a pharmacokinetics study. J Pharm Biomed Anal, 138, 118-125. DOI: 10.1016/j. jpba.2017.02.006

28. Ohyama K, Kinoshita N, Kishikawa N, Kuroda N. (2008). A simple and rapid CZE method for the analysis of mycophenolic acid and its phenol glucuronide metabolite in human. Electrophoresis, 29 (17), 3658-3664. DOI: 10.1002/elps.200700952

29. Ohyama K, Kishikawa N, Nakagawa H, Kuroda N, Nishikido M, Teshima M, To H, Kitahara T, Sasaki H. (2008). Simultaneous determination of mycophenolic acid and its acyl and phenol glucuronide metabolites in human serum by capillary zone electrophoresis. J Pharm Biomed Anal, 47 (1), 201-206. DOI: 10.1016/j.jpba.2007.12.028

30. Oliveira CH, Barrientos-Astigarraga RE, Sucupira M, Graudens GS, Muscará MN, Nuccia G. (2002). Quantification of methyldopa in human plasma by high-performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry. Application to a bioequivalence study. J Chromatogr B, 768 (2), 341-348. DOI: 10.1016/S15700232(01)00612-2

31. Rissling O, Bauer S, Shipkova M, Glander P, Mai M, Hambach P, Budde K. (2016). Simultaneous determination of mycophenolate and its metabolite mycophenolate-7-o-glucuronide with an isocratic HPLC-UV-based method in human plasma and stability evaluation. Scand J Clin Lab Invest, 76 (8), 612-619. DOI: 10.1080/00365513.2016.1230775

32. Róna K, Ary K, Renczes G, Gachályi B, Grézal GY, Drabant S, Klebovich I. (2001). Comparative bioavailability of alpha-methyldopa normal and film tablet formulations after single oral administration in healthy volunteers. Eur J Drug Metab Pharmacok, 26 (1-2), 25-30.

33. Shihabi ZK. (2009). Enhanced detection in capillary electrophoresis: Example determination of serum mycophenolic acid. Electrophoresis, 30 (9), 1516-1521.

34. Stockis A, Guelen PJM, De Vos D. (2002). Identification of mebeverine acid as the main circulating metabolite of mebeverine in man. J Pharm Biomed Anal, 29 (1-2), 335-340.

35. Valizadeh H, Nemati M, Hallaj-Nezhadi S, Ansarin M, Zakeri-Milani P. (2010). Single dose bioequivalence study of a-methyldopa tablet formulations using a modified HPLC method. Arzneimittelforschung, 60 (10), 607-611. DOI: 10.1055/s-0031-1296333

36. Vlase L, Mihu D, Popa D-S, Popa A, Briciu C, Loghin F, Ciortea R, Mihu C. (2013). Determination of methyldopa in human plasma by LC/MS-MS for therapeutic drug monitoring. Stud Univer Babes-Bolyai Chem, 58 (1), 31-41.

37. Van de Merbel NC, Hendriks G, Imbos R, Tuunainen J, Rouru J, Nikkanen H. (2011). Quantitative determination of free and total dopamine in human plasma by LC-MS/MS: the importance of sample preparation. Bioanal, 3 (17), 1949-1961. DOI: 10.4155/bio.11.170

38. Wang L, Qiang W, Li Y, Cheng Z, Xie M. (2017). A novel freeze-dried storage and preparation method for the determination of mycophenolic acid in plasma by high-performance liquid chromatography. Biomed Chromatogr, 31 (9), 3-27. DOI: 10.1002/bmc.3958