Использование дот-иммуноанализа при расшифровке вспышки псевдотуберкулёза в Томской области

Актуальность. Псевдотуберкулёз остаётся серьёзной проблемой здравоохранения, что  определяет целесообразность разработки экспрессных методов его ранней диагностики. Для обнаружения патогена нами сконструирована тест-система для дот-иммуноанализа (ДИА) на основе меченых наночастицами серебра (НЧС) антител, изолированных из гипериммунной кроличьей сыворотки, полученной против убитых клеток Yersinia pseudotuberculosis сероварианта О:1b.

Цель исследования. Оценка возможности использования дот-иммуноанализа для экспресс-идентификации культур Y. pseudotuberculosis, выделенных из клинического материала и объектов окружающей среды, на начальном этапе бактериологического исследования при проведении лабораторной диагностики заболевания.

Методы. В работе использованы материалы по вспышке псевдотуберкулёза в МКОУ «Крыловская школа-интернат» Бакчарского района Томской области в 2021 г. Специфические антитела из кроличьих гипериммунных сывороток, полученных против корпускулярного антигена Y.  pseudotuberculosis  3704 серотипа  О:1b, метили НЧС и  использовали в ДИА на нитроцеллюлозных мембранах. О наличии в исследуемом материале возбудителя псевдотуберкулёза судили по формированию пятен серого цвета разной интенсивности (от 4+ до 1+).

Результаты. Все исследованные штаммы Y. pseudotuberculosis, выделенные бактериологическим методом из клинического материала от больных людей и объектов окружающей среды, обнаруживались в ДИА в концентрациях ≥ 3,1 × 10⁴ микробных клеток в 1 мл (м.к./мл).

Заключение. Разработанная тест-система для ДИА с использованием НЧС в качестве маркера специфических антител для обнаружения Y. pseudotuberculosis в культурах, выделенных из смывов с овощей и клинического материала от больных, в том числе с микст-инфекцией, позволяет с высокой чувствительностью (≥ 3,1 × 104 м.к./мл) обнаруживать возбудитель псевдотуберкулёза, обеспечивая экспрессную идентификацию изолированных культур на начальном этапе бактериологического исследования. 

1. Шестакова И.В., Ющук Н.Д. Инфекционные болезни. Заболеваемость и смертность.В:Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я. (ред.). Инфекционные болезни: национальное руководство; 3-е изд. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2021: 21-31.

2. Литвин В.Ю., Сомов Г.П., Пушкарева В.И. Сапронозы как природно-очаговые болезни. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010; (1): 10-16.

3. Махнев М.В. Антропургические очаги псевдотуберкулеза: механизмы формирования в воинских коллективах. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006; (2): 11-17.

4. Galindo CL, Rosenzweig JA, Kirtley ML, Chopra AK. Pathogenesis of Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis in human yersiniosis. J Pathog. 2011; 2011: 182051. doi: 10.4061/2011/182051

5. Vasala M, Hallanvuo S, Ruuska P, Suokas R, Siitonen A, Hakala M. High frequency of reactive arthritis in adults after Yersinia pseudotuberculosis O:1 outbreak caused by contaminated grated carrots. Ann Rheum Dis. 2014; 73(10): 1793-1796. doi: 10.1136/annrheumdis-2013-203431

6. Pärn T, Hallanvuo S, Salmenlinna S, Pihlajasaari A, Heikkinen S, Telkki-Nykänen H, et al. Outbreak of Yersinia pseudotuberculosis O:1 infection associated with raw milk consumption, Finland, spring 2014. Euro Surveill. 2015; 20(40): 30033. doi: 10.2807/1560-7917.ES.2015.20.40.30033

7. Keto-Timonen R, Pontinen A, Aalto-Araneda M, Korkeala H. Growth of Yersinia pseudotuberculosis strains at different temperatures, pH values, and NaCl and ethanol concentrations. J Food Prot. 2018; 81(1): 142-149. doi: 10.4315/0362-028X.JFP-17-223

8. Тимченко Н.Ф., Персиянова Е.В. Роль растений в экологии Yersinia pseudotuberculosis. Фундаментальные исследования. 2013; (6): 1442-1448.

9. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю., Дробященко М.А., Поляков В.Ю., Мухачев А.Я. Эпидемиологическая опасность формирования биопленок в условиях пищевого производства. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2011. (2): 17-23.

10. The European Union summary report on trends and sources of zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks in 2017. EFSAJ. 2018; 16(12): e05500. doi: 10.2903/j.efsa.2018.5500

11. Чеснокова М.В., Климов В.Т., Никитин А.Я., Ярыгина М.Б., Иннокентьева Т.И., Балахонов С.В. Анализ эпидемиологической ситуации по псевдотуберкулезу и кишечному иерсиниозу в России и прогноз заболеваемости на среднесрочную перспективу. Здоровье населения и среда обитания. 2018; (9): 59-64. doi: 10.35627/2219-5238/2018-306-9-59-64

12. Бренёва Н.В., Балахонов С.В., Никитин А.Я., Мельцов И.В., Шаракшанов М.Б., Кузьменков В.В., и др. Выявление и прогнозирование рисков распространения природно-очаговых инфекций на пострадавших от паводка территориях Иркутской области. Анализ риска здоровью. 2021; (2): 94-104. doi: 10.21668/health.risk/2021.2.09

13. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В. (ред.). Специфическая индикация патогенных биологических агентов: практическое руководство; 2-е изд., перераб. и доп. Саратов: ООО ПКФ «Буква» (Ижевск); 2014.

14. Загоскина Т.Ю., Балахонов С.В., Марков Е.Ю., Николаев В.Б., Субычева Е.Н., Чапоргина Е.А., и др. Апробация диагностических тест-систем с использованием наночастиц серебра в качестве маркеров специфических антител для скрининга исследуемого материала на наличие антигенов возбудителей чумы, бруцеллеза, туляремии и ботулотоксина в дот-иммуноанализе. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2014; 23(4): 61-64.

15. Загоскина Т.Ю., Марков Е.Ю., Андреевская Н.М., Климов В.Т., Николаев В.Б., Крюкова А.В., и др. Получение гипериммунных псевдотуберкулезных сывороток. Acta biomedica scientifica. 2021; 6(3): 86-94. doi: 10.29413/ABS.2021-6.3.9

16. McKinney MM, Parkinson A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid. J Immunol Meth. 1987; 96(2): 271-278. doi: 10.1016/0022-1759(87)90324-3

17. Загоскина Т.Ю., Чеснокова М.В., Климов В.Т., Попова Ю.О., Марков Е.Ю., Старикова О.А. Конструирование тест-системы с наночастицами коллоидного серебра для обнаружения возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в дотиммуноанализе. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017; (1): 55-61. doi: 10.36233/0372-9311-2017-1-55-61

18. Полтавченко А.Г., Яковченко А.М., Кривенчук Н.А., Карпышев Н.Н. Многопрофильная серодиагностика инфекционных заболеваний. 3. Визуализация результатов анализа. Биотехнология. 2007; (2): 63-71.

19. Бургасова О.А., Кожевникова Г.М., Чеснокова М.В., Климов В.Т., Тетова В.Б., Королюк А.М., и др. Иерсиниозы: псевдо туберкулез и кишечный иерсиниоз. М.: Российский университет дружбы народов; 2021.