Максимова Александра Александровна – кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Aleksandra A. Maksimova – Cand. Sc. (Med.), researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Тыринова Тамара Викторовна – доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Tamara V. Tyrinova – Dr. Sc. (Biol.), lead researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Сахно Людмила Васильевна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Ludmila V. Sakhno – Cand. Sc. (Biol.), senior researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Тихонова Марина Александровна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Marina A. Tikhonova – Cand. Sc. (Biol.), senior researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Шевела Екатерина Яковлевна – доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Ekaterina Ya. Shevela – Dr. Sc. (Med.), lead researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Останин Александр Анатольевич – доктор медицинских наук, главный научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Aleksandr A. Ostanin – Dr. Sc. (Med.), chief researcher at the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Черных Елена Рэмовна – доктор медицинских наук, заведующая лабораторией клеточной иммунотерапии Ф
630099, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, д.14
Elena R. Chernykh – Dr. Sc. (Med.), head of the Laboratory of Cellular Immunotherapy
Yadrintsevskaya str., 14, Novosibirskaya obl., Novosibirsk 630099
Обоснование. Ранее в нашей лаборатории был разработан протокол получения макрофагов с выраженной противовоспалительной и репаративной/ нейрорегенераторной активностью, поляризующим фактором для которых является взаимодействие с апоптотическими клетками – эффероцитоз (M2(Eff)). Благодаря уникальному секретому данные клетки являются перспективными кандидатами для клеточной терапии заболеваний, ассоциированных с нейровоспалением. Однако экспрессия ингибиторных рецепторов PD-1 и TIM-3 на M2(Eff) и их связь с продукцией цитокинов остается невыясненной.
Цель. Охарактеризовать экспрессию PD-1 и TIM-3 на макрофагах М2(Eff) и определить их роль в регуляции продукции прои противовоспалительных цитокинов (IL-10 и TNF-α).
Материалы и методы. Макрофаги получали из моноцитов периферической крови здоровых доноров. Экспрессию PD-1 и TIM-3, а также продукцию IL-10 и TNF-α анализировали методом проточной цитометрии. Для оценки вклада PD-1 и TIM-3 в цитокин-секреторную активность клетки предварительно обрабатывали соответствующими блокирующими антителами и далее определяли внутриклеточный уровень IL-10 и TNF-α.
Результаты. М2(Eff) отличались более высоким уровнем PD-1 и TIM-3 по сравнению с М1 культурами, преимущественно за счет клеток с сочетанной экспрессией данных маркеров, а также более высоким PD-1 и более низким TIM-3 по сравнению с «классическими» М2 макрофагами, поляризованными интерлейкином 4. Доля IL-10+ клеток была выше в культурах М2(Eff), экспрессирующих PD-1, а также в TIM-3-экспрессирующих клетках после стимуляции макрофагов липополисахаридом по сравнению с оппозитными популяциями. Уровень TNF-α был выше в TIM-3+ макрофагах. Блокирование PD-1 на этапе стимуляции липополисахаридом увеличивало долю TNF-α+ клеток, тогда как блокирование TIM-3 не оказывало такого эффекта.
Заключение. Макрофаги M2(Eff) характеризуются уникальным профилем экспрессии PD-1 и TIM-3, и эти молекулы ассоциированы с продукцией цитокинов IL-10 и TNF-α.
Background. We previously developed a protocol for generating macrophages with pronounced anti-inflammatory and reparative/neuroregenerative activity, polarized by efferocytosis (M2(Eff)). Due to their unique secretome, these cells are promising candidates for cell therapy of neuroinflammatory diseases. However, the expression of the inhibitory receptors PD-1 and TIM-3 on M2(Eff) and its relationship with cytokine production remain unclear.
Aim. To characterize PD-1 and TIM-3 expression on M2(Eff) macrophages and determine their role in the regulation of proand anti-inflammatory cytokine production (IL-10 and TNF-α).
Materials and methods. Macrophages were differentiated from peripheral blood monocytes of healthy donors. PD-1 and TIM-3 expression, as well as IL-10 and TNF-α production, were assessed by flow cytometry. To evaluate the contribution of PD-1 and TIM-3 to cytokine secretion, cells were pre-treated with blocking antibodies, followed by assessment of intracellular IL-10 and TNF-α levels.
Results. M2(Eff) exhibited higher PD-1 and TIM-3 levels compared to M1 cultures, primarily due to cells co-expressing both markers. M2(Eff) also had higher levels of PD-1 and lower levels of TIM-3 compared to “classical” M2 macrophages polarized by IL-4. The proportion of IL-10-positive cells was higher in M2(Eff) cultures expressing PD-1, as well as in TIM-3-expressing cells after lipopolysaccharide stimulation, compared to the negative populations. TNF-α levels were higher in TIM-3-positive macrophages compared to TIM-3-negative ones. PD-1 blockade during lipopolysaccharide stimulation increased the proportion of TNF-α-expressing cells, whereas TIM-3 blockade had no such effect.
Conclusion. M2(Eff) macrophages induced by apoptotic cells display a unique PD-1 and TIM-3 expression profile. Moreover, PD-1 and TIM-3 are associated with IL-10 and TNF-α production.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.