Ляпунова Наталья Андреевна – кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций, Институт эпидемиологии и микробиологии,
664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
Natalia A. Liapunovа – Cand. Sc. (Biol.), Research Officer at the Laboratory of Arthropod-Borne Infections, Institute of Epidemiology and Microbiology,
Timiryazeva st., 16, Irkutsk 664003
Хаснатинов Максим Анатольевич – доктор биологических наук, главный научный сотрудник, руководитель лаборатории трансмиссивных инфекций, Институт эпидемиологии и микробиологии,
664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
Maxim A. Khasnatinov – Dr. Sc. (Biol.), Chief Researcher, Head of the Laboratory of Arthropod-Borne Infections, Institute of Epidemiology and Microbiology,
Timiryazeva st., 16, Irkutsk 664003
Данчинова Галина Анатольевна – доктор биологических наук, главный научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций, Институт эпидемиологии и микробиологии,
664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
Galina A. Danchinova – Dr. Sc. (Biol.), Chief Researcher at the Laboratory of Arthropod-Borne Infections, Institute of Epidemiology and Microbiology,
Timiryazeva st., 16, Irkutsk 664003
Соловаров Иннокентий Сергеевич – кандидат биологических наук, младший научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций, Институт эпидемиологии и микробиологии,
664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
Innokentii S. Solovarov – Cand. Sc. (Biol.), Junior Research Officer at the Laboratory of Arthropod-Borne Infections, Institute of Epidemiology and Microbiology,
Timiryazeva st., 16, Irkutsk 664003
Обоснование. Рукокрылые являются хозяевами и переносчиками широкого спектра зоонозов. Исследование иммунного ответа этих млекопитающих на вирусные инфекции необходимо для раскрытия фундаментальных механизмов циркуляции зоонозных инфекций в природе. Существует гипотеза о постоянно «включенной» активности белков интерферонового пути у рукокрылых для противодействия вирусным инфекциям. В этом исследовании мы оценили уровень активности системы врожденного иммунитета в клеточной линии почки сибирской ночницы (Myotis sibiricus, Kastschenko, 1905) MdbK3-14, взяв в качестве маркера экспрессию интерферона бета.
Цель исследования. Оценить фоновый уровень экспрессии гена интерферона бета (IFN-β) в неинфицированных клетках Myotis sibiricus.
Методы. Культуру клеток MdbK3-14 выращивали в 24-луночных планшетах. Монослои клеток открепляли раствором трипсина и выделяли суммарную РНК. Концентрацию мРНК транскриптов гена IFN-β и референтных генов бета-актина (ACTB) и субъединицы A сукцинатдегидрогеназного комплекса (SDHA) определяли с помощью одностадийной мультиплексной ОТ-рвПЦР и подтверждали с помощью ОТ-цПЦР.
Результаты. Разработаны специфичные праймеры с зондом для детекции мРНК гена IFN-β в клетках рукокрылых. Выявлена стабильная детекция транскриптов генов SDHA и IFN-β как в ОТ-рвПЦР (CV = 0,5 % и CV = 0,2 % соответственно), так и в ОТ-цПЦР (CV = 0,8 % и CV = 1,4 % соответственно). Детекция мРНК ACTB в ОТ-цПЦР также проходила равномерно во всех образцах (CV = 0,8 %), однако в ОТ-рвПЦР выявлена некоторая нестабильность для бета-актина (CV = 3,6 %). Результаты количественного определения в ОТ-рвПЦР и ОТ-цПЦР коррелировали между собой. Установлено, что уровень экспрессии IFN-β в клетках MdbK3-14 сопоставим (в ОТ-рвПЦР в среднем 0,97 ± 0,15 отн.ед.) или несколько ниже (в ОТ-цПЦР в среднем 0,13 ± 0,05 отн.ед.), чем экспрессия белков домашнего хозяйства ACTB и SDHA.
Заключение. При отсутствии иммунной стимуляции в клетках почки M. sibiricus наблюдается фоновая экспрессия IFN-β.
Background. The study of the immune response of these mammals to viral infections is necessary to reveal the fundamental mechanisms of the circulation of zoonotic infections in nature. There is a hypothesis about the constantly “on” activity of the interferon pathway proteins, developed evolutionarily in bats to counteract viral infections. We assessed the expression of interferon beta as a marker of the innate immune system in kidney cells of the Siberian bat (Myotis sibiricus, Kastschenko, 1905) MdbK3-14.
The aim. Evaluation of the background level of interferon beta (IFN-β) gene expression in bat cells as a marker of the activity of the mammalian innate immune system.
Materials and methods. MdbK3-14 cells were grown in 24-well plates. Cell monolayers were detached with trypsin solution and total RNA was isolated. The concentration of mRNA of IFN-β gene transcripts and reference genes beta actin (ACTB) and succinate dehydrogenase subunit A (SDHA) was determined by one-step multiplex RT-qPCR and confirmed by RT-dPCR.
Results. Specific primers with a probe for detecting mRNA of the IFN-β gene in bat cells were designed. The detection of SDHA and IFN-β gene transcripts was stable both in RT-qPCR (CV = 0.5 % and CV = 0.2 %, respectively) and in RT-dPCR (CV = 0.8 % and CV = 1.4 %, respectively). In addition, stable detection of ACTB mRNA was achieved using RT-dPCR (CV = 0.8 %), but the average variability value for actin using RT-qPCR exceeded the permissible value (CV = 3.6 % with an acceptable CV ≤ 2 %). The results of quantitative determination in RT-qPCR and RT-dPCR correlated with each other. The expression levels of IFN-β in MdbK3-14 cells averaged 0.97 ± 0.15 relative units in RT-qPCR and 0.13 ± 0.05 relative units in RT-dPCR.
Conclusions. In the absence of immune stimulation, background expression of IFN-β occurs in the M. sibiricus kidney cell line.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.