actabiomedicaActa Biomedica ScientificaActa Biomedica Scientifica2541-94202587-9596Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems10.12737/article_59e8590672ae06.68650343actabiomedica-439Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯ И ВИРУСОЛОГИЯMICROBIOLOGY AND VIRUSOLOGYАнтивирусная активность экстрактов трав против вируса клещевого энцефалита (обзор литературы)Antiviral activity of herbal extracts against the tick borne encephalitis virus (literature review)СоловаровИ. С.SolovarovI. S.keschass@mail.ruХаснатиновМ. А.KhasnatinovM. A.khasnatinov@yandex.ruЛяпуновА. В.LiapunovA. V.liapunov.asp@mail.ruМанзароваЭ. Л.ManzarovaE. L.manzarova89@yandex.ruБолотоваН. А.BolotovaN. A.nataly2193@mail.ruОюунцэцэгН. ..OyuntsetsegN. ..oyuntsetseg.n@mnums.edu.mnДанчиноваГ. А.DanchinovaG. A.dan-chin@yandex.ruФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека»Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction ProblemsИнститут традиционной медицины, Монгольский национальный университет медицинских наукInstitute of Traditional Medicine, Mongolian National University of Medical Sciences20172809201725(1)9399Copyright © Соловаров И.С., Хаснатинов М.А., Ляпунов А.В., Манзарова Э.Л., Болотова Н.А., Оюунцэцэг Н..., Данчинова Г.А., 20172017Соловаров И.С., Хаснатинов М.А., Ляпунов А.В., Манзарова Э.Л., Болотова Н.А., Оюунцэцэг Н..., Данчинова Г.А.Solovarov I.S., Khasnatinov M.A., Liapunov A.V., Manzarova E.L., Bolotova N.A., Oyuntsetseg N..., Danchinova G.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.actabiomedica.ru/jour/article/view/439

Клещевой энцефалит (КЭ) - это природно-очаговая инфекция, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией и поражением серого вещества головного мозга (энцефалит) или оболочек головного и спинного мозга. Заболевание предаётся человеку при укусах иксодовых клещей и может привести к стойким неврологическим расстройствам и даже к смерти больного. Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) относится к семейству Flaviviridae, которое включает более 50 вирусов животных и человека, в том числе такие патогены, как вирус жёлтой лихорадки, вирусы японского и клещевого энцефалитов, вирус Денге и вирус гепатита С. В настоящее время единственным средством специфического лечения и профилактики ВКЭ являются противовирусные иммуноглобулины человека, полученные из крови иммунизированных доноров. Для этого препарата характерен целый ряд недостатков, что обуславливает актуальность поиска альтернативных противовирусных средств. В статье приводится краткий обзор литературных данных о противовирусных препаратах из растительного сырья, а также предлагается схема для оценки и идентификации лекарственных молекул против ВКЭ как в цельных экстрактах, так и в отдельных фракциях частей и органов растений.

Tick-borne encephalitis (TBE) is a widely known viral disease that is transmitted through the bites of ixodid ticks. In severe cases, it leads to disability or death of the patient. The causative agent of the TBE is the tick-borne encephalitis virus (TBEV), which belongs to the Flaviviridae family. Despite the great importance of TBE in human pathology, currently the only way to prevent and treat this disease is a donor immunoglobulin, which has a number of significant disadvantages. In this paper, we analyzed modern literature on the detection of antiviral properties of herbal preparations and assessed the possibility of using them to search for new drugs against TBE. In general, the published works can be divided into two areas of research - the study of whole plant extracts and the study of the biological activity of the purified extract components. The most informative results can be obtained under certain conditions; for example, the study of both water extracts of plants and extracts with organic solvents, fractionation of the initial preparations with the detected antiviral activity followed by the concentration of the target substance; identification of an antiviral agent to obtain standardized drugs and preclinical testing in laboratory animals and cell cultures. This approach made it possible to identify three substances - hebulinic acid, panicalagin and baikalein - possessing inhibitory activity against Dengue flavivirus. The article discusses the possibility of using these substances against TBEV and the optimal algorithm for searching for antiviral agents in plant preparations.

вирус клещевого энцефалитаэкстракты травTerminalia chebulatick-borne encephalitis virusherbal extractsT. chebulaReferencesБеликов В.Г., Бережной А.В. Экологическая оценка современных лекарственных возможностей противовирусной терапии // Экология человека. -2006. - № 2. - С. 42-48Беликов В.Г., Бережной А.В. Экологическая оценка современных лекарственных возможностей противовирусной терапии // Экология человека. -2006. - № 2. - С. 42-48Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Майстровская О.С., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение активности препарата люромарин in vitro в отношении вируса клещевого энцефалита // Антибиотики и химиотерапия. - 2010. - Т. 55, № 7-8. - С. 17Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Майстровская О.С., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение активности препарата люромарин in vitro в отношении вируса клещевого энцефалита // Антибиотики и химиотерапия. - 2010. - Т. 55, № 7-8. - С. 17Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение эффективности препарата люромарин при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей // Антибиотики и химиотерапия. - 2011. - Т. 56, № 7-8. - С. 13-15Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Попов А.М., Артюков А.А., Козловская Э.П. Изучение эффективности препарата люромарин при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей // Антибиотики и химиотерапия. - 2011. - Т. 56, № 7-8. - С. 13-15Покровский В.И., Пак С.Г., Брико Н.И., Данилкин Б.К. Инфекционные болезни и эпидемиология. -М.: ГЭОТАР-Мед, 2003. - 816 cПокровский В.И., Пак С.Г., Брико Н.И., Данилкин Б.К. Инфекционные болезни и эпидемиология. -М.: ГЭОТАР-Мед, 2003. - 816 cПрофилактика клещевого вирусного энцефалита. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.3.2352-08. - Москва. 2008Профилактика клещевого вирусного энцефалита. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.3.2352-08. - Москва. 2008Скрипченко Н.В. Клещевой энцефалит у детей: диагностика, лечение и профилактика // Terra Medica Nova. - 2010. - № 1. - С. 5-11Скрипченко Н.В. Клещевой энцефалит у детей: диагностика, лечение и профилактика // Terra Medica Nova. - 2010. - № 1. - С. 5-11Скрипченко Н.В., Моргацкий Н.В., Аксенов О.А., Иванова Г.П., Тюленева Г.А., Караськова Н.Г., Иванова М.В., Карасев В.В. Новый подход к профилактике клещевого энцефалита у детей // Инфекционные болезни. - 2005. - Т. 3, № 4. - С. 61-64Скрипченко Н.В., Моргацкий Н.В., Аксенов О.А., Иванова Г.П., Тюленева Г.А., Караськова Н.Г., Иванова М.В., Карасев В.В. Новый подход к профилактике клещевого энцефалита у детей // Инфекционные болезни. - 2005. - Т. 3, № 4. - С. 61-64Соловаров И.С., Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А., Ляпунов А.В., Болотова Н.А., Манзарова Э.Л., Кондратов И.Г., Беликов С.И. Оценка вируснейтрализующих свойств ДНК-аптамеров и экстрактов лекарственных растений в отношении вируса клещевого энцефалита // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2017. - Т. 2. № 1 (113). - С. 84-88Соловаров И.С., Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А., Ляпунов А.В., Болотова Н.А., Манзарова Э.Л., Кондратов И.Г., Беликов С.И. Оценка вируснейтрализующих свойств ДНК-аптамеров и экстрактов лекарственных растений в отношении вируса клещевого энцефалита // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2017. - Т. 2. № 1 (113). - С. 84-88Фоткина Г.И., Рейхель В.М., Фролова М.П., Фролова Т.В., Погодина В.В. Противовирусное действие экстрактов лекарственных растений при экспериментальном клещевом энцефалите // Вопросы вирусологии. - 1993. - № 4. - С. 170-173Фоткина Г.И., Рейхель В.М., Фролова М.П., Фролова Т.В., Погодина В.В. Противовирусное действие экстрактов лекарственных растений при экспериментальном клещевом энцефалите // Вопросы вирусологии. - 1993. - № 4. - С. 170-173Barak V., Halperin T., Kalickman I. (2001). The effect of Sambucol, a black elderberry-based, natural product, on the production of human cytokines: I. Inflammatory cytokines. Eur Cytokine Netw, 12 (2), 290-296.Barak V., Halperin T., Kalickman I. (2001). The effect of Sambucol, a black elderberry-based, natural product, on the production of human cytokines: I. Inflammatory cytokines. Eur Cytokine Netw, 12 (2), 290-296.Burke D.S., Monath T.P., Knipe D.M., Knipe D.M., Howley P.M., Griffin D.E., Lamb R.A., Martin MAm Roizman B, Straus SE. (2001). Flaviviruses. Fields Virology, 1043-1125. doi: 10.1093/emboj/cdg270.Burke D.S., Monath T.P., Knipe D.M., Knipe D.M., Howley P.M., Griffin D.E., Lamb R.A., Martin MAm Roizman B, Straus SE. (2001). Flaviviruses. Fields Virology, 1043-1125. doi: 10.1093/emboj/cdg270.Cesar G.Z., Alfonso M.G., Marius M.M., Elizabeth E.M., Angel C.B., Maira H.R., Guadalupe C.L., Manuel J.E., Ricardo R.C. (2011). Inhibition of HIV-1 reverse transcriptase, toxico-logical and chemical profile of Calophyllum brasiliense extracts from Chiapas, Mexico. Fitoterapia, 1027-34. doi: 10.1016/j.fitote.2011.06.006.Cesar G.Z., Alfonso M.G., Marius M.M., Elizabeth E.M., Angel C.B., Maira H.R., Guadalupe C.L., Manuel J.E., Ricardo R.C. (2011). Inhibition of HIV-1 reverse transcriptase, toxico-logical and chemical profile of Calophyllum brasiliense extracts from Chiapas, Mexico. Fitoterapia, 1027-34. doi: 10.1016/j.fitote.2011.06.006.Dumpis U., Crook D., Oksi J. (1999). Tick-borne encephalitis. Clin Infect Dis, (4), 882-890. doi: 10.1086/515195.Dumpis U., Crook D., Oksi J. (1999). Tick-borne encephalitis. Clin Infect Dis, (4), 882-890. doi: 10.1086/515195.Geretti A.M., Armenia D., Ceccherini-Silberstein F. (2012). Emerging patterns and implications of HIV-1 integrase inhibitor resistance. Curr Opin Infect Dis, 25 (6), 677-686. doi: 10.1097/QCO).0b013e32835a1de7.Geretti A.M., Armenia D., Ceccherini-Silberstein F. (2012). Emerging patterns and implications of HIV-1 integrase inhibitor resistance. Curr Opin Infect Dis, 25 (6), 677-686. doi: 10.1097/QCO).0b013e32835a1de7.Gould E.A., Clegg J.C.S. (2007). Growth, titration and purification of togaviruses. Virology: A Practical Approach, 43-48.Gould E.A., Clegg J.C.S. (2007). Growth, titration and purification of togaviruses. Virology: A Practical Approach, 43-48.Gubler D.J., Kuno G., Markoff L. (2007). Flaviviruses. Fields Virology, 1153-1252.Gubler D.J., Kuno G., Markoff L. (2007). Flaviviruses. Fields Virology, 1153-1252.Hsu M.J., Hung S.L. (2013). Antiherpetic potential of 6-bromoindirubin-3’-acetoxime (BIO-acetoxime) in human oral epithelial cells. Arch Virol, 1287-1296. doi: 10.1007/s00705-013-1629-3.Hsu M.J., Hung S.L. (2013). Antiherpetic potential of 6-bromoindirubin-3’-acetoxime (BIO-acetoxime) in human oral epithelial cells. Arch Virol, 1287-1296. doi: 10.1007/s00705-013-1629-3.Huerta-Reyes M., Basualdo Mdel C., Abe F., Jimenez-Estrada M., Soler C., Reyes-Chilpa R. (2004). HIV-1 inhibitory compounds from Calophyllum brasiliense leaves. Biol Pharm Bull, 27 (9), 1471-1475.Huerta-Reyes M., Basualdo Mdel C., Abe F., Jimenez-Estrada M., Soler C., Reyes-Chilpa R. (2004). HIV-1 inhibitory compounds from Calophyllum brasiliense leaves. Biol Pharm Bull, 27 (9), 1471-1475.Intisar A., Zhang L., Luo H., Kiazolu J.B., Zhang R., Zhang W. (2012). Anticancer constituents and cytotoxic activity of methanol-water extract of Polygonum bistorta L. Afr J Tradit Complement Altern Med, (1), 53-59.Intisar A., Zhang L., Luo H., Kiazolu J.B., Zhang R., Zhang W. (2012). Anticancer constituents and cytotoxic activity of methanol-water extract of Polygonum bistorta L. Afr J Tradit Complement Altern Med, (1), 53-59.Lin L.T., Chen T.Y., Lin S.C., Chung C.Y., Lin T.C., Wang G.H., Anderson R., Lin C.-C., Richardson C.D. (2013). Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry. BMC Microbiol, 7, 13-187. doi: 10.1186/14712180-13-187.Lin L.T., Chen T.Y., Lin S.C., Chung C.Y., Lin T.C., Wang G.H., Anderson R., Lin C.-C., Richardson C.D. (2013). Broad-spectrum antiviral activity of chebulagic acid and punicalagin against viruses that use glycosaminoglycans for entry. BMC Microbiol, 7, 13-187. doi: 10.1186/14712180-13-187.Lindenbach B.D., Rice C.M. (2003). Molecular biology of flaviviruses. Adv Virus Res, 59, 23-61.Lindenbach B.D., Rice C.M. (2003). Molecular biology of flaviviruses. Adv Virus Res, 59, 23-61.Lindquist L., Vapalahti O. (2008). Tick-borne encephalitis. Lancet, 371, 1861-1871. doi: 10.1016/S0140-6736(08)60800-4.Lindquist L., Vapalahti O. (2008). Tick-borne encephalitis. Lancet, 371, 1861-1871. doi: 10.1016/S0140-6736(08)60800-4.Lubbe A, Seibert I, Klimkait T, van der Kooy F. (2012). Ethnopharmacology in overdrive: The remarkable anti-HIV activity of Artemisia annua. J Ethnopharmacol, 141 (3), 854-859. doi: 10.1016/j.jep.2012.03.024.Lubbe A, Seibert I, Klimkait T, van der Kooy F. (2012). Ethnopharmacology in overdrive: The remarkable anti-HIV activity of Artemisia annua. J Ethnopharmacol, 141 (3), 854-859. doi: 10.1016/j.jep.2012.03.024.Kaufmann B., Rossmann M.G. (2010). Molecular mechanisms involved in the early steps of flavivirus cell entry. Microbes Infect, 13 (1), 1-9. doi: 10.1016/j.micinf.2010.09.005.Kaufmann B., Rossmann M.G. (2010). Molecular mechanisms involved in the early steps of flavivirus cell entry. Microbes Infect, 13 (1), 1-9. doi: 10.1016/j.micinf.2010.09.005.Khan M.T., Ather A., Thompson K.D., Gambari R. (2005). Extracts and molecules from medicinal plants against herpes simplex viruses. Antiviral Res, 67 (2), 107119. doi: 10.1016/j.antiviral.2005.05.002.Khan M.T., Ather A., Thompson K.D., Gambari R. (2005). Extracts and molecules from medicinal plants against herpes simplex viruses. Antiviral Res, 67 (2), 107119. doi: 10.1016/j.antiviral.2005.05.002.Kudo E., Taura M., Matsuda K., Shimamoto M., Kariya R., Goto H., Hattori S., Kimura S., Okada S. (2013). Inhibition of HIV-1 replication by a tricyclic coumarin GUT-70 in acutely and chronically infected cells. Bioorg Med Chem Lett, 23 (3), 606-609. doi: 10.1016/j.bmcl.2012.12.034.Kudo E., Taura M., Matsuda K., Shimamoto M., Kariya R., Goto H., Hattori S., Kimura S., Okada S. (2013). Inhibition of HIV-1 replication by a tricyclic coumarin GUT-70 in acutely and chronically infected cells. Bioorg Med Chem Lett, 23 (3), 606-609. doi: 10.1016/j.bmcl.2012.12.034.Manag rinchin junai: Traditional medical source book (1978), 179.Manag rinchin junai: Traditional medical source book (1978), 179.Mansfield K.L., Johnson N., Phipps L.P., Stephenson J.R., Fooks A.R., Solomon T. (2009). Tick-borne encephalitis virus - a review of an emerging zoonosis. J Gen Virol, 90 (8), 1781-1794. doi: 10.1099/vir.0.011437-0.Mansfield K.L., Johnson N., Phipps L.P., Stephenson J.R., Fooks A.R., Solomon T. (2009). Tick-borne encephalitis virus - a review of an emerging zoonosis. J Gen Virol, 90 (8), 1781-1794. doi: 10.1099/vir.0.011437-0.Myagmar B.E., Aniya Y. (2000). Free radical scavenging action of medicinal herbs from Mongolia. Phytomedicine, 7 (3), 221-229.Myagmar B.E., Aniya Y. (2000). Free radical scavenging action of medicinal herbs from Mongolia. Phytomedicine, 7 (3), 221-229.Nikolaev S.M., Fedorov A.V., Toropova A.A., Razuvaeva I.G., Sambueva Z.G., Lubsandorzhieva P.B. (2014). Hepatoprotective effect of Hypecoum erectum extract on experimental D-galactosamine-induced damage of rat liver. Eksp Klin Farmakol, 77 (9), 18-22.Nikolaev S.M., Fedorov A.V., Toropova A.A., Razuvaeva I.G., Sambueva Z.G., Lubsandorzhieva P.B. (2014). Hepatoprotective effect of Hypecoum erectum extract on experimental D-galactosamine-induced damage of rat liver. Eksp Klin Farmakol, 77 (9), 18-22.Oyuntsetseg N., Khasnatinov M.A., Molor-Erdene P., Oyunbileg Ja., Liapunov A.V., Danchinova G.A., Oldokh S., Baigalmaa J., Chimedragchaa Ch. (2014). Evaluation of direct antiviral activity of the DEVA-5 herb formulation and extracts of five Asian plants against influenza a virus H3N8. BMC Complement Altern Med, 10, 14-235. doi: 10.1186/1472-6882-14-235.Oyuntsetseg N., Khasnatinov M.A., Molor-Erdene P., Oyunbileg Ja., Liapunov A.V., Danchinova G.A., Oldokh S., Baigalmaa J., Chimedragchaa Ch. (2014). Evaluation of direct antiviral activity of the DEVA-5 herb formulation and extracts of five Asian plants against influenza a virus H3N8. BMC Complement Altern Med, 10, 14-235. doi: 10.1186/1472-6882-14-235.Polyak S.J., Morishima C., Lohmann V., Pal S., Lee D.Y., Liu Y., Graf T.N., Oberlies N.H. (2010). Identification of hepatoprotective flavonolignans from silymarin. Proc Natl Acad Sci USA, 107 (13), 5995-5999. doi: 10.1073/pnas.0914009107.Polyak S.J., Morishima C., Lohmann V., Pal S., Lee D.Y., Liu Y., Graf T.N., Oberlies N.H. (2010). Identification of hepatoprotective flavonolignans from silymarin. Proc Natl Acad Sci USA, 107 (13), 5995-5999. doi: 10.1073/pnas.0914009107.Polyak S.J., Morishima C., Shuhart M.C., Wang C.C., Liu Y., Lee D.Y. (2007). Inhibition of T-cell inflammatory cytokines, hepatocyte NF-kappaB signaling, and HCV infection by standardized Silymarin. Gastroenterology, 132 (5), 1925-1936.Polyak S.J., Morishima C., Shuhart M.C., Wang C.C., Liu Y., Lee D.Y. (2007). Inhibition of T-cell inflammatory cytokines, hepatocyte NF-kappaB signaling, and HCV infection by standardized Silymarin. Gastroenterology, 132 (5), 1925-1936.Superti F., Ammendolia M.G., Marchetti M. (2008). New advances in anti-HSV chemotherapy. Curr Med Chem, 15 (9), 900-911.Superti F., Ammendolia M.G., Marchetti M. (2008). New advances in anti-HSV chemotherapy. Curr Med Chem, 15 (9), 900-911.Tumurbaatar N. (1998). Hot-natured disorders in traditional Mongolian Medicine, 19. Ulaanbaatar, 92.Tumurbaatar N. (1998). Hot-natured disorders in traditional Mongolian Medicine, 19. Ulaanbaatar, 92.Wang L.J., Geng C.A., Ma Y.B., Huang X.Y., Luo J., Chen H., Zhang X.M, Chen J.J. (2012). Synthesis, biological evaluation and structure-activity relationships of glycyrrhetinic acid derivatives as novel anti-hepatitis B virus agents. Bioorg Med Chem Lett, 22 (10), 3473-3479. doi: 10.1016/j.bmcl.2012.03.081.Wang L.J., Geng C.A., Ma Y.B., Huang X.Y., Luo J., Chen H., Zhang X.M, Chen J.J. (2012). Synthesis, biological evaluation and structure-activity relationships of glycyrrhetinic acid derivatives as novel anti-hepatitis B virus agents. Bioorg Med Chem Lett, 22 (10), 3473-3479. doi: 10.1016/j.bmcl.2012.03.081.Webster D., Taschereau P., Lee T.D., Jurgens T. (2006). Immunostimulant properties of Heracleum maximum Bartr. J Ethnopharmacol, (3), 360-363.Webster D., Taschereau P., Lee T.D., Jurgens T. (2006). Immunostimulant properties of Heracleum maximum Bartr. J Ethnopharmacol, (3), 360-363.Xie Y,.Huang B., Yu K., Shi F., Liu T., Xu W. (2013). Caffeic acid derivatives: A new type of influenza neuraminidase inhibitors. Bioorg Med Chem Lett, 23 (12), 3556-3560. doi: 10.1016/j.bmcl.2013.04.033.Xie Y,.Huang B., Yu K., Shi F., Liu T., Xu W. (2013). Caffeic acid derivatives: A new type of influenza neuraminidase inhibitors. Bioorg Med Chem Lett, 23 (12), 3556-3560. doi: 10.1016/j.bmcl.2013.04.033.Yin S.Y., Yang N.S., Lin T.J. (2017). Phytochemicals approach for developing cancer immunother-apeutics. Front Pharmacol, 19, 8-386. doi: 10.3389/fphar.2017.00386.Yin S.Y., Yang N.S., Lin T.J. (2017). Phytochemicals approach for developing cancer immunother-apeutics. Front Pharmacol, 19, 8-386. doi: 10.3389/fphar.2017.00386.Yu J.S., Kim J.H., Lee S., Jung K., Kim K.H., Cho J.Y. (2017). Src/Syk-targeted anti-inflammatory actions of triterpenoidal saponins from gac (Momordica cochinchinensis) seeds. AmJ Chin Med, 45 (3), 459-473. doi: 10.1142/S0192415X17500288.Yu J.S., Kim J.H., Lee S., Jung K., Kim K.H., Cho J.Y. (2017). Src/Syk-targeted anti-inflammatory actions of triterpenoidal saponins from gac (Momordica cochinchinensis) seeds. AmJ Chin Med, 45 (3), 459-473. doi: 10.1142/S0192415X17500288.Zandi K., Teoh B.T., Sam S.S., Wong P.F., Mustafa M.R., Abubakar S. (2012). Novel antiviral activity of baicalein against dengue virus. BMC Complement Altern Med, 9, 12- 214. doi: 10.1186/1472-6882-12-214.Zandi K., Teoh B.T., Sam S.S., Wong P.F., Mustafa M.R., Abubakar S. (2012). Novel antiviral activity of baicalein against dengue virus. BMC Complement Altern Med, 9, 12- 214. doi: 10.1186/1472-6882-12-214.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.