Малярчиков Андрей Викторович – кандидат медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой симуляционно-тренингового обучения,
672000, г. Чита, ул. Горького, 39А
Andrey V. Malyarchikov – Cand. Sc. (Med.), Head of The Department of Simulation Training Education,
Gorkogo str. 39A, Chita 672090
Шаповалов Константин Геннадьевич – доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой анестезиологии, реанимации и интенсивной терапии,
672000, г. Чита, ул. Горького, 39А
Konstantin G. Shapovalov – Dr. Sc. (Med.), Professor, Head of the Department of Anesthesiology, Resuscitation and Intensive Care,
Gorkogo str. 39A, Chita 672090
Цель исследования. Выявить частоту встречаемости полиморфизма гена TLR4 Asp299Gly (rs4986790) и установить его вклад в развитие органной дисфункции у больных тяжёлой пневмонией на фоне гриппа A/H1N1.
Материалы и методы. В исследование включено 55 больных тяжёлой пневмонией на фоне гриппа A/H1N1. Критерии включения: пневмония тяжёлого течения; наличие консолидации/синдрома «матового стекла» по данным рентгенографии/компьютерной томографии органов грудной клетки. Критерии исключения: нестабильная гемодинамика; индекс массы тела > 30; сахарный диабет; ВИЧ; туберкулёз; онкопатология. Верификация возбудителя в респираторном мазке выполнялась при помощи метода полимеразной цепной реакции (ПЦР): идентифицирована РНК вируса гриппа A/H1N1. Возраст пациентов составил 47 [38; 62] лет. Мужчин было 47,8 %, женщин – 52,2 %. Пациенты были поделены на две группы: 1-я группа – с оценкой по шкале SOFA (Sequential Organ Failure Assessment) ≥ 2 баллов; 2-я группа – с оценкой по шкале SOFA < 2 баллов. Определение однонуклеотидных полиморфизмов (SNP, single nucleotide polymorphism) генов осуществлялось методом ПЦР с использованием стандартных наборов НПФ «Литех» (Москва). Амплификацию фрагментов гена TLR4 проводили в термоциклере «Бис-М111» (ООО «Бис-Н», Новосибирск). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК экспресс-кровь», затем проводилась реакция амплификации. Детекцию продукта амплификации проводили в 3%-м агарозном геле. Результаты. У больных тяжёлой пневмонией на фоне гриппа А/H1N1 частота развития полиорганной дисфункции (SOFA ≥ 2 баллов) составила 24 (43,6 %) случая. При анализе частоты встречаемости минорного аллеля Gly, согласно генетическим моделям, установлены различия между пациентами 1-й и 2-й групп в кодоминантной (p = 0,023; отношение шансов (ОШ) – 8,82 (0,95–81,89)) и доминантной (p = 0,005; ОШ = 12,35 (1,40–109,07)) моделях. Заключение. Тяжёлое течение пневмонии при гриппе A/H1N1 сопровождается высокой частотой развития органной дисфункции. Риск развития органной недостаточности увеличивался у больных тяжёлой пневмонией с выявленным полиморфизмом гена TLR4 Asp299Gly, что, вероятно, требует дальнейшего изучения. Ключевые слова: TLR4, полиморфизм, грипп A/H1N1, пневмония, органная дисфункция>˂ 2 баллов. Определение однонуклеотидных полиморфизмов (SNP, single nucleotide polymorphism) генов осуществлялось методом ПЦР с использованием стандартных наборов НПФ «Литех» (Москва). Амплификацию фрагментов гена TLR4 проводили в термоциклере «Бис-М111» (ООО «Бис-Н», Новосибирск). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК экспресс-кровь», затем проводилась реакция амплификации. Детекцию продукта амплификации проводили в 3%-м агарозном геле.
Результаты. У больных тяжёлой пневмонией на фоне гриппа А/H1N1 частота развития полиорганной дисфункции (SOFA ≥ 2 баллов) составила 24 (43,6 %) случая. При анализе частоты встречаемости минорного аллеля Gly, согласно генетическим моделям, установлены различия между пациентами 1-й и 2-й групп в кодоминантной (p = 0,023; отношение шансов (ОШ) – 8,82 (0,95–81,89)) и доминантной (p = 0,005; ОШ = 12,35 (1,40–109,07)) моделях.
Заключение. Тяжёлое течение пневмонии при гриппе A/H1N1 сопровождается высокой частотой развития органной дисфункции. Риск развития органной недостаточности увеличивался у больных тяжёлой пневмонией с выявленным полиморфизмом гена TLR4 Asp299Gly, что, вероятно, требует дальнейшего изучения.
The aim of the study. To identify the frequency of occurrence of TLR4 Asp299Gly (rs4986790) gene polymorphism and to establish its contribution to the development of organ dysfunction in patients with severe pneumonia associated with A/H1N1 influenza.
Materials and methods. The study included 55 patients with severe pneumonia associated with A/H1N1 influenza. Inclusion criteria: severe pneumonia; consolidation/ground-glass syndrome according to chest X-ray/CT. Exclusion criteria: unstable hemodynamics; body mass index > 30; diabetes mellitus; HIV; tuberculosis, oncopathology. Verification of the pathogen in the respiratory swab was carried out using PCR method: A/H1N1 influenza virus RNA was identified. The age of the patients was 47 [38; 62] years. Among all the patients the proportion of men was 47.8 %, of women – 52.2 %. Patients were divided into 2 groups: group 1 included patients with SOFA scale (Sequential Organ Failure Assessment) score ≥ 2 points; group 2 – patients with SOFA scale score ˂ 2 points. Gene SNPs were determined by PCR method using standard kits developed by Research and Production Company “Litekh” (Moscow). Amplification of the TLR4 gene fragments was carried out in a thermocycler Bis-M111 (Bis-N LLC, Novosibirsk). Genomic DNA isolated from whole blood leukocytes using the “DNA Express Blood” reagent was analyzed followed by an amplification reaction. The amplification product was detected in a 3% agarose gel.
Results. Multiple organ dysfunction (SOFA scale score ≥ 2 points) in patients with severe pneumonia associated with A/H1N1 influenza was registered in 24 (43.6 %) cases. When analyzing the frequency of occurrence of the minor Gly allele, according to genetic models, the differences were established between patients of the groups 1 and 2 in codominant (p = 0.023; odds ratio (OR) – 8.82 (0.95–81.89)) and dominant (p = 0.005; OR = 12.35 (1.40–109.07)) models.
Conclusion. Severe pneumonia associated with A/H1N1 influenza is accompanied by a high incidence of organ dysfunction. The risk of organ failure development is 2.1 times increased in patients with severe pneumonia with identified TLR4 Asp299Gly gene polymorphism, which probably requires further study.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.