actabiomedicaActa Biomedica ScientificaActa Biomedica Scientifica2541-94202587-9596Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems10.29413/ABS.2022-7.5-1.11actabiomedica-3808Research ArticleМИКРОБИОЛОГИЯ И ВИРУСОЛОГИЯMICROBIOLOGY AND VIRUSOLOGYУстойчивость биоплёнок Rhodococcus ruber к наночастицам CuO в зависимости от состава экзополимерного матриксаResistance of Rhodococcus ruber biofilms to CuO nanoparticles depending on exopolymer matrix compositionhttps://orcid.org/0000-0002-9266-3877БаяндинаЕ. А.BayandinaE. A.

Баяндина Елена Александровна – студентка

614068, г. Пермь, ул. Букирева, 15

Elena A. Bayandina – Student at the Department of Microbiology and Immunology

Bukireva str. 15, Perm 614068

elenabaiandinapsu@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-7220-4553ГлебовГ. Г.GlebovG. G.

Глебов Григорий Геннадьевич – инженер кафедры микробиологии и иммунологии, ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»; аспирант, младший научный сотрудник, Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» УрО РАН

614068, г. Пермь, ул. Букирева, 15614081, г. Пермь, ул. Голева, 13

Grigorii G. Glebov – Engineer at the Department of Microbiology and Immunology, Perm State University; Postgraduate, Junior Research Officer, Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Perm Federal Research Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences

Bukireva str. 15, Perm 614068Goleva str. 13, Perm 614081

grisha899@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9165-8363КуюкинаМ. С.KuyukinaM. S.

Куюкина Мария Станиславовна – доктор биологических наук, профессор кафедры микробиологии и иммунологии, ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»; ведущий научный сотрудник, Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» УрО РАН

614068, г. Пермь, ул. Букирева, 15614081, г. Пермь, ул. Голева, 13

Maria S. Kuyukina – Dr. Sc. (Biol.), Professor at the Department of Microbiology and Immunology, Perm State University; Leading Research Officer, Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Perm Federal Research Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences

Bukireva str. 15, Perm 614068Goleva str. 13, Perm 614081

kuyukina@iegm.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2558-4789ИвшинаИ. Б.IvshinaI. B.

Ившина Ирина Борисовна – доктор биологических наук, профессор, академик РАН, профессор кафедры микробиологии и иммунологии, ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»; заведующая лабораторией, Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» УрО РАН

614068, г. Пермь, ул. Букирева, 15614081, г. Пермь, ул. Голева, 13

Irina B. Ivshina – Dr. Sc. (Biol.), Professor, Academician of RAS, Professor at the Department of Microbiology and Immunology, Perm State University; Head of the Laboratory, Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Perm Federal Research Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences

Bukireva str. 15, Perm 614068Goleva str. 13, Perm 614081

Ivshina@iegm.ruФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»Perm State UniversityФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»; Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» УрО РАНPerm State University; Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Perm Federal Research Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences20220712202275-1100109Copyright © Баяндина Е.А., Глебов Г.Г., Куюкина М.С., Ившина И.Б., 20222022Баяндина Е.А., Глебов Г.Г., Куюкина М.С., Ившина И.Б.Bayandina E.A., Glebov G.G., Kuyukina M.S., Ivshina I.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.actabiomedica.ru/jour/article/view/3808

   Введение. Широкое использование наночастиц оксида меди (НЧ CuO) увеличивает их выброс в окружающую среду, что приводит к накоплению в трофических цепях. Бактериальные биоплёнки более устойчивы к физико-химическим факторам по сравнению с планктонными клетками благодаря экзополимерному матриксу (ЭПМ), состоящему из полисахаридов, белков, липидов и нуклеиновых кислот. Актинобактерии рода Rhodococcus перспективны для экобиотехнологии благодаря способности к биодеградации нефтепродуктов, пестицидов и других органических загрязнителей, а также биоаккумуляции тяжёлых металлов.   Цель исследования. Изучить влияние НЧ CuO на жизнеспособность клеток Rhodococcus ruber ИЭГМ 231 в биоплёнках и динамику основных компонентов ЭПМ.   Материалы и методы. Биоплёнки R. ruber выращивали на покровных стёклах в присутствии НЧ CuO, компоненты ЭПМ изучали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (КЛСМ) путём дифференцирующего окрашивания флурофорами: LIVE/DEAD – для живых и мёртвых клеток; Nile Red – для липидов; FITC – для белков; Calcofluor White – для бета-полисахаридов.   Результаты. Биоплёнки R. ruber, выращенные в минеральной среде с 1,0 об. % н-гексадекана, были более устойчивы к НЧ CuO по сравнению с биоплёнками, растущими в полноценной питательной среде (МПБ). Это обусловлено более интенсивным формированием ЭПМ, играющего основную роль в защите клеток от бактерицидного действия нанометалла. Показан слабый стимулирующий эффект низкой (0,001 г/л) концентрации НЧ CuO на биоплёнкообразование родококков. Изучены динамика и локализация основных компонентов ЭПМ биоплёнок при длительном (24–72 ч) культивировании с НЧ CuO. Выявлено повышенное содержание липидного компонента ЭПМ, увеличение относительного содержания полисахаридов и белков при воздействии высоких (0,01–0,1 г/л) концентраций НЧ CuO.   Заключение. Понимание механизмов взаимодействия нанометаллов и биоплёнок родококков будет способствовать созданию эффективных биокатализаторов на их основе и способов очистки окружающей среды. Полученные данные могут также использоваться для борьбы с нежелательными биоплёнками с помощью наночастиц металлов.

   Background. The widespread use of copper oxide nanoparticles (CuO NPs) increases their release into the environment, which leads to accumulation in trophic chains. Bacterial biofilms are more resistant to physico-chemical factors compared to planktonic cells due to an exopolymer matrix (EPM) consisting of polysaccharides, proteins, lipids and nucleic acids. Rhodococcus actinobacteria are promising for environmental biotechnology due to biodegradation of petroleum products, pesticides and other organic pollutants, as well as bioaccumulation of heavy metals.   The aim. To investigate effects of CuO NPs on the viability of Rhodococcus ruber IEGM 231 cells in biofilms and the dynamics of EPM components.   Methods. R. ruber biofilms were grown on microscopy cover glass with CuO NPs and EPM components were studied using confocal laser scanning microscopy (CLSM) by differentiating staining with LIVE/DEAD to determine the number of living and dead cells, Nile Red for lipids, FITC for proteins and Calcofluor White for betapolysaccharides.   Results. It was found that R. ruber biofilms grown in a mineral medium with1.0 vol.% n-hexadecane are more resistant to CuO NPs compared to biofilms growing in a rich culture medium (meat-peptone broth). This was due to more intensive EPM formation, which plays a major role in protecting cells from the bactericidal action of nanometals. A weak stimulating effect of a low (0.001 g/l) concentration of CuO NPs on biofilm formation was registered. Dynamics and localization of main EPM components were monitored during prolonged (24–72 h) biofilm cultivation with CuO NPs. When exposed to high (0.01–0.1 g/l) concentrations of CuO NPs, a consistently high lipid content and an increase in concentrations of polysaccharides and proteins were revealed.   Conclusion. Understanding the complex interaction mechanisms of nanometals and biofilms will contribute to the development of effective biocatalysts based on immobilized bacterial cells. Also, the obtained data can be used to combat unwanted biofilms with the help of metal nanoparticles.

биоплёнкиRhodococcusнаночастицы металловконфокальная лазерная сканирующая микроскопияэкзополимерный матриксbiofilmsRhodococcusmetal nanoparticlesconfocal laser scanning microscopyexopolymer matrixЭто исследование было профинансировано Министерством науки и высшего образования Российской Федерации (АААА-А20-120081990069-3, АААА-А19-119112290008-4) и Российским научным фондом (18-14-00140). Статья опубликована в рамках V Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных с международным участием «Фундаментальные и прикладные аспекты в медицине и биологии»This study was funded by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (АААА-А20-120081990069-3, АААА-А19-119112290008-4) and Russian Science Foundation (18-14-00140).ReferencesGrigore M. E., Biscu E. R., Holban A. M., Gestal M. C., Grumezescu A. M. Methods of synthesis, properties and biomedical applications of CuO nanoparticles. Pharmaceuticals (Basel). 2016; 9 (4): 75. doi: 10.3390/ph9040075Grigore M. E., Biscu E. R., Holban A. M., Gestal M. C., Grumezescu A. M. Methods of synthesis, properties and biomedical applications of CuO nanoparticles. Pharmaceuticals (Basel). 2016; 9 (4): 75. doi: 10.3390/ph9040075Pugazhendhi A., Kumar S. S., Manikandan M., Saravanan M. Photocatalytic properties and antimicrobial efficacy of Fe-doped CuO nanoparticles against the pathogenic bacteria and fungi. Microb Pathogenesis. 2018; 122: 84-89. doi: 10.1016/j.micpath.2018.06.016Pugazhendhi A., Kumar S. S., Manikandan M., Saravanan M. Photocatalytic properties and antimicrobial efficacy of Fe-doped CuO nanoparticles against the pathogenic bacteria and fungi. Microb Pathogenesis. 2018; 122: 84-89. doi: 10.1016/j.micpath.2018.06.016Chethana D. M., Thanujaa T. C., Maheshb H. M., Kirubac M. S., Josec A. S., Barshilia H. C., et al. Synthesis, structural, magnetic and NO<sub>2</sub> gas sensing property of CuO nanoparticles. Ceramics Int. 2021; 47: 10381-10387. doi: 10.1016/j.ceramint.2020.06.129Chethana D. M., Thanujaa T. C., Maheshb H. M., Kirubac M. S., Josec A. S., Barshilia H. C., et al. Synthesis, structural, magnetic and NO<sub>2</sub> gas sensing property of CuO nanoparticles. Ceramics Int. 2021; 47: 10381-10387. doi: 10.1016/j.ceramint.2020.06.129Ruiz P., Katsumiti A., Nieto J. A., Bori J., Jimeno-Romero A., Reip P., et al. Short-term effects on antioxidant enzymes and long-term genotoxic and carcinogenic potential of CuO nanoparticles compared to bulk CuO and ionic copper in mussels Mytilus galloprovincialis. Mar Env Res. 2015; 11: 107-120. doi: 10.1016/j.marenvres.2015.07.018Ruiz P., Katsumiti A., Nieto J. A., Bori J., Jimeno-Romero A., Reip P., et al. Short-term effects on antioxidant enzymes and long-term genotoxic and carcinogenic potential of CuO nanoparticles compared to bulk CuO and ionic copper in mussels Mytilus galloprovincialis. Mar Env Res. 2015; 11: 107-120. doi: 10.1016/j.marenvres.2015.07.018Jahid I. K., Han R. N., Sang-Do-Ha S. S. Competitive interactions inside mixed-culture biofilms of Salmonella typhimurium and cultivable indigenous microorganisms on lettuce enhance microbial resistance of their sessile cells to ultraviolet C (UV-C) irradiation. Food Res Int. 2014; 55: 445-454. doi: 10.1016/j.foodres.2013.11.042Jahid I. K., Han R. N., Sang-Do-Ha S. S. Competitive interactions inside mixed-culture biofilms of Salmonella typhimurium and cultivable indigenous microorganisms on lettuce enhance microbial resistance of their sessile cells to ultraviolet C (UV-C) irradiation. Food Res Int. 2014; 55: 445-454. doi: 10.1016/j.foodres.2013.11.042Al-Shamiri M. M., Zhang S., Mi P., Liu Y., Xun M., Yang E., et al. Phenotypic and genotypic characteristics of Acinetobacter baumannii enrolled in the relationship among antibiotic resistance, biofilm formation and motility. Microb Pathog. 2021; 155: 104922. doi: 10.1016/j.micpath.2021.104922Al-Shamiri M. M., Zhang S., Mi P., Liu Y., Xun M., Yang E., et al. Phenotypic and genotypic characteristics of Acinetobacter baumannii enrolled in the relationship among antibiotic resistance, biofilm formation and motility. Microb Pathog. 2021; 155: 104922. doi: 10.1016/j.micpath.2021.104922Recupido F., Petala M., Casertac S., Kostoglou S., Guidoc S., Karapantsios T. D. Wetting properties of dehydrated biofilms under different growth conditions. Coll Surf B Biointerfaces. 2021; 210: 112245. doi: 10.1016/j.colsurfb.2021.112245Recupido F., Petala M., Casertac S., Kostoglou S., Guidoc S., Karapantsios T. D. Wetting properties of dehydrated biofilms under different growth conditions. Coll Surf B Biointerfaces. 2021; 210: 112245. doi: 10.1016/j.colsurfb.2021.112245Brilhante R. S. N., de Aguiar F. R. M., da Silva M. L.Q., de Oliveira J. S., de Camargo Z. P., Rodrigues A. M., et al. Antifungal susceptibility of Sporothrix schenckii complex biofilms. Med Mycol. 2018; 56: 297-306. doi: 10.1093/mmy/myx043Brilhante R. S. N., de Aguiar F. R. M., da Silva M. L.Q., de Oliveira J. S., de Camargo Z. P., Rodrigues A. M., et al. Antifungal susceptibility of Sporothrix schenckii complex biofilms. Med Mycol. 2018; 56: 297-306. doi: 10.1093/mmy/myx043Martínková L., Uhnáková B., Pátek M., Nešvera J., Křen V. Biodegradation potential of the genus Rhodococcus. Environ Int. 2009; 5: 162-177. doi: 10.1016/j.envint.2008.07.018Martínková L., Uhnáková B., Pátek M., Nešvera J., Křen V. Biodegradation potential of the genus Rhodococcus. Environ Int. 2009; 5: 162-177. doi: 10.1016/j.envint.2008.07.018Krivoruchko A. V., Kuyukina M. S., Ivshina I. B. Advanced Rhodococcus biocatalysts for environmental biotechnologies. Catalysts. 2021; 9 (3): 236. doi: 10.3390/catal9030236Krivoruchko A. V., Kuyukina M. S., Ivshina I. B. Advanced Rhodococcus biocatalysts for environmental biotechnologies. Catalysts. 2021; 9 (3): 236. doi: 10.3390/catal9030236Kuyukina M. S., Ivshina I. B., Krivoruchko A. V., Peshkur T. V., Cunninghamc C. J. Improvement of jet fuel contaminated water treatment in a fluidized-bed bioreactor by introducing nickel nanoparticles. Int Biodeterior Biodegrad. 2021; 164: 105308. doi: 10.1016/j.ibiod.2021.105308Kuyukina M. S., Ivshina I. B., Krivoruchko A. V., Peshkur T. V., Cunninghamc C. J. Improvement of jet fuel contaminated water treatment in a fluidized-bed bioreactor by introducing nickel nanoparticles. Int Biodeterior Biodegrad. 2021; 164: 105308. doi: 10.1016/j.ibiod.2021.105308Ivshina I. B., Kuyukina M. S., Kamenskikh T. N., Krivoruchko A. V., Tyumina E. A., Elkin A. A. Hydrocarbon-oxidizing Rhodococci: Features of Biological organization under the influence of eco-pollutants. Atlas-monograph. 2021. (In Russ.).Ivshina I. B., Kuyukina M. S., Kamenskikh T. N., Krivoruchko A. V., Tyumina E. A., Elkin A. A. Hydrocarbon-oxidizing Rhodococci: Features of Biological organization under the influence of eco-pollutants. Atlas-monograph. 2021. (In Russ.).Karygianni L., Ren Z., Koo H., Thurnheer T. Biofilm matrixome: Extracellular components in structured microbial communities. Trends Microbiol. 2020; 28: 668-681. doi: 10.1016/j.tim.2020.03.016Karygianni L., Ren Z., Koo H., Thurnheer T. Biofilm matrixome: Extracellular components in structured microbial communities. Trends Microbiol. 2020; 28: 668-681. doi: 10.1016/j.tim.2020.03.016Kuyukina M. S., Ivshina I. B., Rychkova M. I., Chumakov O. B. Effect of cell lipid composition on the formation of nonspecific antibiotic resistance in alkanotrophic rhodococci. Microbiology. 2000; 69: 51-57. doi: 10.1007/BF02757257Kuyukina M. S., Ivshina I. B., Rychkova M. I., Chumakov O. B. Effect of cell lipid composition on the formation of nonspecific antibiotic resistance in alkanotrophic rhodococci. Microbiology. 2000; 69: 51-57. doi: 10.1007/BF02757257Miao M., Wang C., Hou J., Wang P., Ao Y., Li Y., et al. Aggregation and removal of copper oxide (CuO) nanoparticles in wastewater environment and their effects on the microbial activities of wastewater biofilms. Biores Technol. 2016; 216: 537-544. doi: 10.1016/j.biortech.2016.05.082Miao M., Wang C., Hou J., Wang P., Ao Y., Li Y., et al. Aggregation and removal of copper oxide (CuO) nanoparticles in wastewater environment and their effects on the microbial activities of wastewater biofilms. Biores Technol. 2016; 216: 537-544. doi: 10.1016/j.biortech.2016.05.082Selvaraj R. S. A., Rajendran M., Nagaiah H. P. Re-potentiation of β-lactam antibiotic by synergistic combination with biogenic copper oxide nanocubes against biofilm forming multidrugresistant bacteria. Molecules. 2019; 17: 3055. doi: 10.3390/molecules24173055Selvaraj R. S. A., Rajendran M., Nagaiah H. P. Re-potentiation of β-lactam antibiotic by synergistic combination with biogenic copper oxide nanocubes against biofilm forming multidrugresistant bacteria. Molecules. 2019; 17: 3055. doi: 10.3390/molecules24173055Naseer M., Ramadan R., Xing J., Samak N. A. Facile green synthesis of copper oxide nanoparticles for the eradication of multidrug resistant Klebsiella pneumonia and Helicobacter pylori biofilms. Int Biodeter Biodegrad. 2019; 159: 105201. doi: 10.1016/j.ibiod.2021.105201Naseer M., Ramadan R., Xing J., Samak N. A. Facile green synthesis of copper oxide nanoparticles for the eradication of multidrug resistant Klebsiella pneumonia and Helicobacter pylori biofilms. Int Biodeter Biodegrad. 2019; 159: 105201. doi: 10.1016/j.ibiod.2021.105201Fagerlind M. G., Webb J. S., Barraud N., McDougald D., Jansson A., Nilsson P., et al. Dynamic modelling of cell death during biofilm development. J Theor Biol. 2012; 295: 23-36. doi: 10.1016/j.jtbi.2011.10.007Fagerlind M. G., Webb J. S., Barraud N., McDougald D., Jansson A., Nilsson P., et al. Dynamic modelling of cell death during biofilm development. J Theor Biol. 2012; 295: 23-36. doi: 10.1016/j.jtbi.2011.10.007D’Acuntoa B., Esposito G., Frunzo L., Pirozzi F. Dynamic modeling of sulfate reducing biofilms. Comput Math Appl. 2011; 62: 2601-2608. doi: 10.1016/j.camwa.2011.07.064D’Acuntoa B., Esposito G., Frunzo L., Pirozzi F. Dynamic modeling of sulfate reducing biofilms. Comput Math Appl. 2011; 62: 2601-2608. doi: 10.1016/j.camwa.2011.07.064Buhmann M., Stiefel P., Maniura-Weber K., Ren Q. In vitro biofilm models for device-related infections. Trends Biotechnol. 2014; 1: 1-4. doi: 10.1016/j.tibtech.2016.05.016Buhmann M., Stiefel P., Maniura-Weber K., Ren Q. In vitro biofilm models for device-related infections. Trends Biotechnol. 2014; 1: 1-4. doi: 10.1016/j.tibtech.2016.05.016Ivshina I. B., Kuyukina M. S., Krivoruchko A. V., Plekhov O. A., Naimark O. B., Podorozhko E. A., et al. Biosurfactantenhanced immobilization of hydrocarbon-oxidizing Rhodococcus ruber on sawdust. Appl Microbiol Biotechnol. 2013; 97: 5315-5327. doi: 10.1007/s00253-013-4869-yIvshina I. B., Kuyukina M. S., Krivoruchko A. V., Plekhov O. A., Naimark O. B., Podorozhko E. A., et al. Biosurfactantenhanced immobilization of hydrocarbon-oxidizing Rhodococcus ruber on sawdust. Appl Microbiol Biotechnol. 2013; 97: 5315-5327. doi: 10.1007/s00253-013-4869-yIkuma K., Decho A. W., Lau B. L. When nanoparticles meet biofilms – interactions guiding the environmental fate and accumulation of nanoparticles. Front Microbiol. 2015; 6: 591. doi: 10.3389/fmicb.2015.00591Ikuma K., Decho A. W., Lau B. L. When nanoparticles meet biofilms – interactions guiding the environmental fate and accumulation of nanoparticles. Front Microbiol. 2015; 6: 591. doi: 10.3389/fmicb.2015.00591Ke P. C., Lin S., Parak W. J., Davis T. P., Caruso F. A decade of the protein corona. ACS Nano. 2017; 11: 11773-11776. doi: 10.1021/acsnano.7b08008Ke P. C., Lin S., Parak W. J., Davis T. P., Caruso F. A decade of the protein corona. ACS Nano. 2017; 11: 11773-11776. doi: 10.1021/acsnano.7b08008Ivshina I. B., Kuyukina M. S., Kostina L. V. Adaptive mechanisms of nonspecific resistance to heavy metal ions in alkanotrophic actinobacteria. Rus J Ecology. 2013; 44 (2): 123-130.Ivshina I. B., Kuyukina M. S., Kostina L. V. Adaptive mechanisms of nonspecific resistance to heavy metal ions in alkanotrophic actinobacteria. Rus J Ecology. 2013; 44 (2): 123-130.Adav S. S., Lin J. C., Yang Z., Whiteley C. G., Lee D. J., Peng X. F., et al. Stereological assessment of extracellular polymeric substances, exo-enzymes, and specific bacterial strains in bioaggregates using fluorescence experiments. Biotechnol Adv. 2016; 28: 255-280. doi: 10.1016/j.biotechadv.2009.08.006Adav S. S., Lin J. C., Yang Z., Whiteley C. G., Lee D. J., Peng X. F., et al. Stereological assessment of extracellular polymeric substances, exo-enzymes, and specific bacterial strains in bioaggregates using fluorescence experiments. Biotechnol Adv. 2016; 28: 255-280. doi: 10.1016/j.biotechadv.2009.08.006Kassinger K. S., Hoek M. L. Biofilm architecture: an emerging synthetic biology target. Synth Sys Biotechnol. 2020; 5: 1-10. doi: 10.1016/j.synbio.2020.01.001Kassinger K. S., Hoek M. L. Biofilm architecture: an emerging synthetic biology target. Synth Sys Biotechnol. 2020; 5: 1-10. doi: 10.1016/j.synbio.2020.01.001Flemming H. C., Wuertz S. Bacteria and archaea on Earth and their abundance in biofilms. Nat Rev Microbiol. 2019; 17: 247-260. doi: 10.1038/s41579-019-0158-9Flemming H. C., Wuertz S. Bacteria and archaea on Earth and their abundance in biofilms. Nat Rev Microbiol. 2019; 17: 247-260. doi: 10.1038/s41579-019-0158-9Hoostal M. J., Bidart-Bouzat M. G., Bouzat J. L. Local adaptation of microbial communities to heavy metal stress in polluted sediments of Lake Erie. FEMS Microbiol Ecol. 2008; 65: 156-168. doi: 10.1111/j.1574-6941.2008.00522.xHoostal M. J., Bidart-Bouzat M. G., Bouzat J. L. Local adaptation of microbial communities to heavy metal stress in polluted sediments of Lake Erie. FEMS Microbiol Ecol. 2008; 65: 156-168. doi: 10.1111/j.1574-6941.2008.00522.xWilmaerts D., Windels E. M., Verstraeten N., Michiels J. General mechanisms leading to persister formation and awakening. Trends Genet. 2019; 35: 401-411. doi: 10.1016/j.tig.2019.03.007Wilmaerts D., Windels E. M., Verstraeten N., Michiels J. General mechanisms leading to persister formation and awakening. Trends Genet. 2019; 35: 401-411. doi: 10.1016/j.tig.2019.03.007

The authors declare that there are no conflicts of interest present.