actabiomedicaActa Biomedica ScientificaActa Biomedica Scientifica2541-94202587-9596Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems10.29413/ABS.2021-6.3.4actabiomedica-2844Research ArticleАКУШЕРСТВО И ГИНЕКОЛОГИЯOBSTETRICS AND GYNAECOLOGYНовый подход к оценке репродуктивных потерь первого триместра беременностиA new approach to assessment of reproductive losses of the first trimester of pregnancyhttps://orcid.org/0000-0002-1024-1532ИшутинаН. А.IshutinaN. A.

 доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ

тел.: (4162) 772815, 89145549764 

 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22, Россия 

 ScD, PhD, Leading staff scientist of Laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation

Tel.: (4162) 772815 

ishutina-na@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0212-0201АндриевскаяИ. А.AndrievskayaI. A.

 доктор биологических наук, заведующая лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ

тел. (4162) 772815

 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22, Россия 

 DSc, PhD, head of laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases,

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation

Tel.: (4162) 772815 

irina-andrievskaja@rambler.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8411-0543ПриходькоН. Г.PrikhodkoN. G.

 аспирант лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ

 тел.: (4162) 772815

 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22, Россия 

 postgraduate student of laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation

Tel.: (4162) 772815 

nikprih@mail.ruФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания»Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration202111082021634352Copyright © Ишутина Н.А., Андриевская И.А., Приходько Н.Г., 20212021Ишутина Н.А., Андриевская И.А., Приходько Н.Г.Ishutina N.A., Andrievskaya I.A., Prikhodko N.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.actabiomedica.ru/jour/article/view/2844 Обоснование

 Обоснование: В настоящее время очевидна роль цитомегаловирусной инфекции в нарушении формирования плаценты и связанных с ним патологических состояний  плода, в основе которых лежат окислительные и воспалительные реакции, вызывающие нарушение  миграции и инвазии трофобластов, ангиогенную модуляцию  плацентарных и маточных сосудов.

Цель исследования

Цель исследования: Провести анализ количественных  показателей гипоксией индуцируемого фактора 1α, α- токоферола и докозагексаеновой кислоты в периферической крови в сопоставлении с  морфологическими изменениями в плаценте и слизистой оболочке матки у серопозитивных женщин с самопроизвольным абортом, ассоциированным с  реактивацией цитомегаловирусной инфекции.

Методы

Методы: Исследования проводили на сроке беременности 7–9 недель. Проанализировано 67 наблюдений, включающих 35 серопозитивных женщин в первом триместре с самопроизвольным абортом, ассоциированным  с реактивацией цитомегаловирусной  инфекции и 32 здоровых серонеративных женщины с добровольным прерыванием беременности. В качестве исследуемого материала использовали стабилизированную кровь из вены, эпителий внутренней поверхности щеки,  цервикального канала, мочу, ворсинчатый хорион, слизистую оболочку матки. Метод иммуноферментного анализа использовали для выявления серологических  маркеров цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ-IgG/IgM-антител, авидность ЦМВ-IgG), содержания гипоксией индуцируемого фактора 1α, α-токоферол – флюорометрическим методом, ПЦР (полимеразную цепную  реакцию) в режиме реального времени – ДНК  ЦМВ, метод газожидкостной хроматографии –  докозагексаеновой кислоты, гистологические методы – общий план строения ворсинчатого хориона и слизистой оболочки матки.

Результаты

Результаты: У серопозитивных женщин с самопроизвольным абортом, ассоциированным с  реактивацией цитомегаловирусной инфекции, средние показатели гипоксией индуцируемого фактора 1α были выше в 1,54 раза, α-токоферола и докозагексаеновой кислоты ниже в 1,71 раза и в 1,40 раза (p <0,001 соответственно), чем в группе серонегативных женщин. Выявлены сильные обратные корреляции. Морфологически  выявлялись признаки задержки формирования ворсин,  децидуализации стромы эндометрия и образования маточно-плацентарных сосудов.

Заключение

Заключение. У серопозитивных женщин с самопроизвольным абортом, ассоциированным с реактивацией цитомегаловирусной инфекции выявлена  сильная связь высоких показателей HIF-1α со снижением α-токоферола и ДГК в периферической крови, что может рассматриваться как неблагоприятный фактор нарушения  формирования плаценты.  

 Background

 Background. At present, the role of cytomegalovirus infection in the disruption of acental formation and associated pathological conditions of the fetus is bvious, which are based on oxidative and inflammatory reactions that cause disruption of igration and invasion of trophoblasts, angiogenic modulation of placental and uterine vessels.

Objective

Objective: To analyze the quantitative indicators of hypoxia-inducible factor 1α, α-tocopherol and docosahexaenoic acid in the peripheral blood in comparison with morphological changes in the placenta and uterine mucosa in seropositive women with spontaneous abortion associated with reactivation of ytomegaloviral infection.

Methods

Methods: Studies were carried out at 7-9 weeks of gestation. 67 observations were analyzed, including 35 seropositive women in the first trimester with spontaneous abortion associated with reactivation of cytomegaloviral infection and 32 healthy seronerative women with voluntary termination of pregnancy. Stabilized blood from vein, epithelium of the inner surface of the cheek, cervical canal, urine, villous chorion, and uterine mucosa were used as the test material. Enzyme immunoassay was used to detect serological markers of cytomegaloviral infection (CMV-IgG/IgM antibodies, CMV-IgG avidity), hypoxia-induced factor 1α, α-tocopherol – by fluorometric method, PCR (polymerase chain reaction) in real time – DNA CMV, the method of gas-liquid chromatography – docosahexaenoic acid, histological methods – the general plan of the structure of the chorionic villus and the mucous membrane of the uterus.

Results

Results: In seropositive women with spontaneous abortion associated with reactivation of cytomegaloviral infection, the average of hypoxia-induced  factor 1α was 1.54 times higher, α-tocopherol and docosahexaenoic acid were 1.71 times lower and 1.40 times lower (p < 0.001, respectively) than in the group of eronegative women. Strong inverse correlations were revealed. Morphologically, there were signs of delayed formation of villi, decidualization of the endometrial stroma and the formation of uteroplacental vessels. 

Conclusion

Conclusion. In seropositive women with spontaneous abortion associated with reactivation of cytomegaloviral infection, a strong association of high HIF-1α values with decrease in α-tocopherol and docosahexaenoic acid in the peripheral blood was revealed, which can be considered as an unfavorable factor in the disruption of placenta formation. 

беременностьцитомегаловирусная инфекциягипоксией индуцируемый фактор 1αα-токоферолдокозагексаеновая кислотаpregnancycytomegalovirus infectionhypoxia-inducible factor 1αα-tocopheroldocosahexaenoic acidИсследование проводилось за счет средств федерального бюджета в рамках государственного задания ФНИ (тема 061, № госрегистрации АААА-А18-118020790064-4).ReferencesМакаров И. О., Воеводин С. М., Шеманаева Т. В. Особенности плацентарной недостаточности при наличии внутриутробной инфекции. Врач-аспирант. 2012; 1. 2 (50): 253–258Makarov IO, Voyevodin SM, Shemanayeva TV. Features of placental insufficiency in the presence of intrauterine infection. Vrach-aspirant. 2012; 1. 2 (50): 253–258. (In Russian)Надеев А. П., Травин М. А., Дробинская А. Н., Карпов М. А., Телятникова Н. В., Жукова В. А. и др. Особенности инфицирования плаценты цитомегаловирусом и вирусом простого герпеса второго типа при доношенной беременности. Journal of Siberian Medical Sciences. 2015; 3: 83Nadeyev AP, Travin MA, Drobinskaya AN, Karpov MA, Telyatnikova NV, Zhukova VA., et al. Features of placenta infection with cytomegalovirus and virus of herpes simplex of the second type at the full-term pregnancy. Journal of Siberian Medical Sciences. 2015; 3: 83. (In Russian)Андриевская И. А., Луценко М. Т., Петрова К. К., Кочегарова Е. Ю., Приходько Н. Г. Плацентарный фактор роста как маркер угрозы ранних самопроизвольных выкидышей при цитомегаловирусной инфекции. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017; 64: 55–59. doi: 10.12737/article_59360cc93f6447.76641762Andriyevskaya IA, Lutsenko MT, Petrova KK, Kochegarova EYu, Prikhod»ko NG. Placental growth factor as a marker of the threatened early miscarriage in women with cytomegalovirus infection. Byulleten» fiziologii i patologii dykhaniya. 2017; 64: 55–59. doi: 10.12737/article_59360cc93f6447.76641762 (In Russian)Charostad J, Mokhtari-Azad DV, Mph MT, Ph D, Yavarian J, Ghavami N, et al. Detection of human herpes viruses 1–5 in miscarriage: A case-control study. Int J Reprod Biomed. 2020; 18 (7): 501–508. doi: 10.18502/ijrm.v13i7.7367Charostad J, Mokhtari-Azad DV, Mph MT, Ph D, Yavarian J, Ghavami N, et al. Detection of human herpes viruses 1–5 in iscarriage: A case-control study. Int J Reprod Biomed. 2020; 18 (7): 501–508. doi: 10.18502/ijrm.v13i7.7367Li JM, Zhang HF, Zhang XQ, Huang GL, Huang HZ, Yu WW. Genetic mechanism associated with congenital cytomegalovirus infection and analysis of effects of the infection on pregnancy outcome. Genet Mol Res. 2015; 14 (4): 13247–13257. doi: 10.4238/2015.October.26.21Li JM, Zhang HF, Zhang XQ, Huang GL, Huang HZ, Yu WW. Genetic mechanism associated with congenital cytomegalovirus infection and analysis of effects of the infection on pregnancy outcome. Genet Mol Res. 2015; 14 (4): 13247–13257. doi: 10.4238/2015.October.26.21Njue A, Coyne C, Margulis AV, Wang D, Marks MA, Russell K, et al. The Role of Congenital Cytomegalovirus Infection in Adverse Birth Outcomes: A Review of the Potential Mechanisms. Viruses. 2020; 13 (1): 20. doi: 10.3390/v13010020Njue A, Coyne C, Margulis AV, Wang D, Marks MA, Russell K, et al. The Role of Congenital Cytomegalovirus Infection in Adverse Birth Outcomes: A Review of the Potential Mechanisms. Viruses. 2020; 13 (1): 20. doi: 10.3390/v13010020Pass RF, Arav-Boger R. Maternal and fetal cytomegalovirus infection: diagnosis, management, and prevention. F1000Res. 2018; 7: 255. doi: 10.12688/f1000research.12517.1Pass RF, Arav-Boger R. Maternal and fetal cytomegalovirus infection: diagnosis, management, and prevention. F1000Res. 2018; 7: 255. doi: 10.12688/f1000research.12517.1Стрижаков А. Н., Кушлинский Н. Е., Тимохина Е. В., Тарабрина Т. В. Роль ангиогенных факторов роста в прогнозировании плацентарной недостаточности. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2009; 8 (4): 5–11Strizhakov AN, Kushlinskiy NE, Timokhina EV, Tarabrina TV. The role of angiogenic growth factors in predicting placental insufficiency. Voprosy ginekologii, akusherstva i perinatologii. 2009; 8 (4): С. 5–11. (In Russian)Михайлин Е. С., Толибова Г. Х., Траль Т. Г. Морфофункциональные особенности последов у несовершеннолетних женщин. Журнал акушерства и женских болезней. 2016; 65 (5): 41–48. doi.org/10.17816/JOWD65541-48Mikhaylin ES, Tolibova GKh, Tral» TG. Morfological and functional features of placentas in minor women. Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney. 2016; 65 (5): 41–48. doi.org/10.17816/JOWD65541-48. (In Russian)Большакова М. В., Беженарь В. Ф., Павлова Н. Г., Пастушенков В. Л., Габаева М. М. Современные представления о патогенезе гипоксии плода и роли в нем гипоксия-индуцируемого фактора (HIF). Акушерство и гинекология Санкт-Петербурга. 2019; 1: 19–24.Bol»shakova MV, Bezhenar» VF, Pavlova NG, Pastushenkov VL, Gabayeva MM. Modern ideas about the pathogenesis of fetal hypoxia and the role of hypoxia-inducible factor (HIF) in it. Akusherstvo i ginekologiya Sankt-Peterburga. 2019; 1: 19–24. (In Russian)Macklin PS, McAuliffe J, Pugh CW, Yamamoto A. Hypoxia and HIF pathway in cancer and the placenta. Placenta. 2017; 56: 8–13. doi: 10.1016/j.placenta.2017.03.010Macklin PS, McAuliffe J, Pugh CW, Yamamoto A. Hypoxia and HIF pathway in cancer and the placenta. Placenta. 2017; 56: 8–13. doi: 10.1016/j.placenta.2017.03.010Yu N, Wu JL, Xiao J, Fan L, Chen SH, Li W. HIF-1α regulates angiogenesis via Notch1/STAT3/ETBR pathway in trophoblastic cells. Cell Cycle. 2019; 18 (24): 3502–3512. doi: 10.1080/15384101.2019.1689481Yu N, Wu JL, Xiao J, Fan L, Chen SH, Li W. HIF-1α regulates angiogenesis via Notch1/STAT3/ETBR pathway in rophoblastic cells. Cell Cycle. 2019; 18 (24): 3502–3512. doi: 10.1080/15384101.2019.1689481Pandya AD, Das MK, Sarkar A, Vilasagaram S, Basak S, Duttaroy AK. Tube formation in the first trimester placental trophoblast cells: Differential effects of angiogenic growth factors and fatty acid. Cell. Biol. Int. 2016; 40 (6): 652–661. doi: 10.1002/cbin.10601Pandya AD, Das MK, Sarkar A, Vilasagaram S, Basak S, Duttaroy AK. Tube formation in the first trimester placental trophoblast cells: Differential effects of angiogenic growth factors and fatty acid. Cell. Biol. Int. 2016; 40 (6): 652–661. doi: 10.1002/cbin.10601Kasture V, Sundrani D, Dalvi S, Swamy M, Kale A, Joshi S. Maternal omega-3 fatty acids and vitamin E improve placental angiogenesis in late-onset but not early-onset preeclampsia. Mol. Cell. Biochem. 2019; 461 (1-2): 159–170. doi:10.1007/s11010-019-03599-4Kasture V, Sundrani D, Dalvi S, Swamy M, Kale A, Joshi S. Maternal omega-3 fatty acids and vitamin E improve placental angiogenesis in late-onset but not early-onset preeclampsia. Mol. Cell. Biochem. 2019; 461 (1-2): 159–170. doi: 10.1007/s11010-019-03599-4Taneda S, Honda K, Tomidokoro K, Uto K, Nitta K, Oda H. Eicosapentaenoic acid restores diabetic tubular injury through regulating oxidative stress and mitochondrial apoptosis. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2010; 299 (6): F1451-F1461. doi: 10.1152/ajprenal.00637.2009Taneda S, Honda K, Tomidokoro K., Uto K, Nitta K, Oda H. Eicosapentaenoic acid restores diabetic tubular injury through regulating oxidative stress and mitochondrial apoptosis. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2010; 299 (6): F1451-F1461. doi:10.1152/ajprenal.00637.2009Rathod RS, Khaire AA, Kale AA, Joshi SR. Maternal omega-3 fatty acid supplementation to a vitamin B12 deficient diet normalizes angiogenic markers in the pup brain at birth. Int. J. Dev Neurosci. 2015; 43 (1): 43–49. doi:10.1016/j.ijdevneu.2015.04.006Rathod RS, Khaire AA, Kale AA, Joshi SR. Maternal omega-3 fatty acid supplementation to a vitamin B12 deficient diet normalizes angiogenic markers in the pup brain at birth. Int. J. Dev Neurosci. 2015; 43 (1): 43–49. doi:10.1016/j.ijdevneu.2015.04.006Hansen LG, Warwich WI. Flurometric micromethod for serum tocoferol. Am. J. Chen Pathology. 1966; 36 (1): 137–138.Hansen LG, Warwich WI. Flurometric micromethod for serum tocoferol. Am. J. Chen Pathology. 1966; 36 (1): 137–138.Морозова О. Л., Мальцева Л. Д., Макарова В. Д. VEGF – маркер гипоксии при повреждении почек различного генеза. Патогенез. 2018; 16 (2): 62–69. doi: 10.25557/2310–0435.2018.0262–69Morozova OL, Mal»tseva LD, Makarova VD. VEGF asa biomarker for hypoxia in kidney injury of different origins. Patogenez. 2018; 16 (2): 62–69. doi: 10.25557/2310–0435.2018.0262–69 (In Russian)Azliana AF, Zainul-Rashid MR, Chandramaya SF, Farouk WI, Nurwardah A, Wong YP, Tan GC. Vascular endothelial growth factor expression in placenta of hypertensive disorder in pregnancy. Indian J Pathol Microbiol. 2017; 60 (4): 515–520. doi: 10.4103/IJPM.IJPM_376_16Azliana AF, Zainul-Rashid MR, Chandramaya SF, Farouk WI, Nurwardah A, Wong YP, Tan GC. Vascular endothelial growth factor expression in placenta of hypertensive disorder in pregnancy. Indian J Pathol Microbiol. 2017; 60 (4): 515–520. doi: 10.4103/IJPM.IJPM_376_16Макаров О. В., Волкова Е. В., Лысюк Е. Ю., Копылова Ю. В. Фетоплацентарный ангиогенез у беременных с плацентарной недостаточностью. Акушерство, гинекология, репродукция. 2013; 7 (3): 13–19Makarov OV, Volkova EV, Lysyuk EYu, Kopylova YuV. Fetoplacental angiogenesis in pregnant women with placental insufficiency. Akusherstvo, ginekologiya, reproduktsiya. 2013; 7 (3): 13–19. (In Russian)Zhao H, Narasimhan P, Kalish F, Wong RJ, Stevenson DK. Dysregulation of hypoxia-inducible factor-1α (Hif1α) expression in the Hmox1-deficient placenta. Placenta. 2020; 99: 108–116. doi: 10.1016/j.placenta.2020.07.015Zhao H, Narasimhan P, Kalish F, Wong RJ, Stevenson DK. Dysregulation of hypoxia-inducible factor-1α (Hif1α) expression in the Hmox1-deficient placenta. Placenta. 2020; 99: 108–116. doi: 10.1016/j.placenta.2020.07.015Левченкова О. С., Новиков В. Е. Индукторы регуляторного фактора адаптации к гипоксии. Российский медико-биологический вестник им. акад. И. П. Павлова. 2014; 2: 135–145Levchenkova OS, Novikov VE. Inducers of the regulatory factor to hypoxia adaptation. Rossiyskiy mediko-biologicheskikh vestnik im. akad. I. P. Pavlova. 2014; 2: 135–145. (In Russian)Мельник А. А. Гипоксией индуцированный фактор для лечения анемии при хронической болезни почек. Почки. 2018; 7 (4): 311–321. doi: 10.22141/2307–257.7.4.2018.148522Mel»nik AA. Hypoxia-inducible factor for the treatment of anemia in chronic kidney disease. Pochki. 2018; 7 (4): 311–321. doi: 10.22141/2307-1257.7.4.2018.148522 (In Russian)Беженарь В. Ф., Павлова Н. Г., Большакова М. В., Пастушенков В. Л., Карев В. Е. Экспрессия гипоксия- индуцированого фактора (HIF1α) в плацентах при хронической плацентарной недостаточности в конце беременности. Уральский медицинский журнал. 2020; 5 (188): 141–145. doi: 10.25694/URMJ.2020.05.29Bezhenar» VF, Pavlova NG, Bol»shakova MV, Pastushenkov VL, Karev VE. Expression of hypoxia-induced factor (HIF1α) in placentas with chronic placental insufficiency at the end of pregnancy. Ural»skiy meditsinskiy zhurnal. 2020; 5 (188): 141–145. doi: 10.25694/URMJ.2020.05.29 (In Russian)Ишутина Н. А., Андриевская И. А., Дорофиенко Н. Н. Малоновый диальдегид и фактор некроза опухолей α в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2015; 55: 78–81Ishutina NA, Andrievskaya IA, Dorofienko NN. Malon dialdehyde and tumor necrosis factor alpha at cytomegalovirus infection during pregnancy. Byulleten» fiziologii i patologii dykhaniya. 2015; 55: 78–81. (in Russian)de Wit RH, Mujić-Delić A, van Senten JR, Fraile-Ramos A, Siderius M, Smit MJ. Human cytomegalovirus encoded chemokine receptor US28 activates the HIF-1α/PKM2 axis in glioblastoma cells. Oncotarget. 2016; 7 (42): 67966–67985. doi: 10.18632/oncotarget.11817de Wit RH, Mujić-Delić A, van Senten JR, Fraile-Ramos A, Siderius M, Smit MJ. Human cytomegalovirus encoded chemokine receptor US28 activates the HIF-1α/PKM2 axis in glioblastoma cells. Oncotarget. 2016; 7 (42): 67966–67985. doi: 10.18632/oncotarget.11817He C, Shan N, Xu P, Ge H, Yuan Y, Liu Y, et al. Hypoxiainduced Downregulation of SRC-3 Suppresses Trophoblastic Invasion and Migration Through Inhibition of the AKT/mTOR Pathway: Implications for the Pathogenesis of Preeclampsia. Sci Rep. 2019; 9 (1): 10349. doi: 10.1038/s41598-019-46699-3He C, Shan N, Xu P, Ge H, Yuan Y, Liu Y, et al. Hypoxiainduced Downregulation of SRC-3 Suppresses Trophoblastic Invasion and Migration Through Inhibition of the AKT/mTOR Pathway: Implications for the Pathogenesis of Preeclampsia. Sci Rep. 2019; 9 (1): 10349. doi: 10.1038/s41598-019-46699-3Ишутина Н. А., Дорофиенко Н. Н. Пероксидация липидов при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2014; 54: 56–59Ishutina NA, Dorofienko NN. Lipid peroxidation in regnancy complicated by cytomegalovirus infection. Byulleten» fiziologii i patologii dykhaniya. 2014; 54: 56–59. (In Russian)Kasimanickam RK, Kasimanickam VR, Haldorson GJ, Tibary A. Effect of tocopherol supplementation during last trimester of pregnancy on mRNA abundances of interleukins and angiogenesis in ovine placenta and uterus. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012; 10:4. doi: 10.1186/1477-7827-10-4Kasimanickam RK, Kasimanickam VR, Haldorson GJ, Tibary A. Effect of tocopherol supplementation during last trimester of pregnancy on mRNA abundances of interleukins and angiogenesis in ovine placenta and uterus. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012; 10: 4. doi: 10.1186/1477-7827-10-4Kasimanickam RK, Kasimanickam VR, Rodriguez JS, Pelzer KD, Sponenberg PD, Thatcher CD. Tocopherol induced angiogenesis in placental vascular network in late pregnant ewes. Reprod. Biol. Endocrinol. 2010; 8: 86. doi.org/10.1186/1477-7827-8-86Kasimanickam RK, Kasimanickam VR, Rodriguez JS, Pelzer KD, Sponenberg PD, Thatcher CD. Tocopherol induced angiogenesis in placental vascular network in late pregnant ewes. Reprod. Biol. Endocrinol. 2010; 8: 86. doi.org/10.1186/1477-7827-8-86Basak S, Das MK, Duttaroy AK. Fatty acid-induced angiogenesis in first trimester placental trophoblast cells: possible roles of cellular fatty acid-binding proteins. Life Sci. 2013; 93 (21): 755–762. doi: 10.1016/j. lfs.2013.09.024Basak S, Das MK, Duttaroy AK. Fatty acid-induced angiogenesis in first trimester placental trophoblast cells: possible roles of cellular fatty acid-binding proteins. Life Sci. 2013; 93 (21): 755–762. doi: 10.1016/j.lfs.2013.09.024Rada CC, Murray G, England SK. The SK3 channel promotes placental vascularization by enhancing secretion of angiogenic factors. American Journal of physiology, endocrinology and metabolism. 2014; 307 (10): E935–943. doi: 10.1152/ajpendo.00319.2014Rada CC, Murray G, England SK. The SK3 channel promotes placental vascularization by enhancing secretion of angiogenic factors. American Journal of physiology, endocrinology and metabolism. 2014; 307 (10): E935–943. doi: 10.1152/ajpendo.00319.2014Irwin DC, McCord JM, Nozik-Grayck E, Beckly G, Foreman B, Sullivan T, White M, T Crossno JJr, Bailey D, Flores SC, Majka S, Klemm D, van Patot MC. A potential role for reactive oxygen species and the HIF-1alpha-VEGF pathway in hypoxiainduced pulmonary vascular leak. Free Radic Biol Med. 2009; 47 (1): 55–61. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2009.03.027Irwin DC, McCord JM, Nozik-Grayck E, Beckly G, Foreman B, Sullivan T, White M, T Crossno JJr, Bailey D, Flores SC, Majka S, Klemm D, van Patot MC. A potential role for reactive oxygen species and the HIF-1alpha-VEGF pathway in hypoxiainduced pulmonary vascular leak. Free Radic Biol Med. 2009; 47 (1): 55–61. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2009.03.027

The authors declare that there are no conflicts of interest present.