actabiomedicaActa Biomedica ScientificaActa Biomedica Scientifica2541-94202587-9596Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems10.29413/ABS.2019-4.1.14actabiomedica-1984Research ArticleФАРМАКОЛОГИЯ И ФАРМАЦИЯPHARMACOLOGY AND PHARMACEUTICSПрименение метода иммуноферментного анализа в исследовании сравнительной фармакокинетики препаратов инсулина гларгинаEnzyme-Linked Immunosorbent Assay Method Application in the Study of Comparative Pharmacokinetics of Insulin Glargin Preparationshttps://orcid.org/0000-0002-3210-4264ШитовЛ. Н.ShitovL. N.

Шитов Леонид Николаевич – кандидат биологических наук, директор

Leonid N. Shitov – Cand. Sc. (Biol.), Director

L.schitov@qayar.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5901-8120ДжуркоЮ. А.DzhurkoYu. A.

Джурко Юрий Александрович – кандидат фармацевтических наук, старший аналитик

Scopus ID: 55457391600 

SPIN-код: 5833-4057

Yuri A. Dzhurko – Cand. Sc. (Pharm.), Senior Analyst

Scopus ID: 55457391600, SPIN-код: 5833-4057

y.dzhurko@qayar.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4594-6097ДрайР. В.DraiR. V.

Драй Роман Васильевич – кандидат медицинских наук, директор департамента клинических исследований

Roman V. Drai – Cand. Sc. (Med.), Director of the Department of Clinical Trials,

roman.drai@geropharm.comhttps://orcid.org/0000-0003-2308-0608МакаренкоИ. Е.MakarenkoI. E.

Макаренко Игорь Евгеньевич – кандидат медицинских наук, медицинский научный советник

Igor E. Makarenko – Cand. Sc. (Med.), Medical Scientific Advisor

igor.makarenko@geropharm.comhttps://orcid.org/0000-0002-0032-0341ХохловА. Л.KhokhlovA. L.

Хохлов Александр Леонидович – доктор медицинских наук, профессор, член-корр. РАН, заведующий кафедрой клинической фармакологии

Scopus ID: 7201745706

Aleksandr L. Khokhlov – Dr. Sc. (Med.), Professor, Corresponding Member of RAS, Head of the Department of Clinical Pharmacology

Scopus ID: 7201745706

al460935@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6746-6858ХозоваЛ. А.KhozovaL. A.

Хозова Лидия Александровна – аналитик

Liliya A. Khozova – Analyst

L.khozova@qayar.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8880-530XАфонькинаО. В.AfonkinaO. V.

Афонькина Олена Валерьевна – руководитель группы клинических операций

Olena V. Afonkina – Head of the Clinical Operations Group

Alena.Afonkina@geropharm.comhttps://orcid.org/0000-0002-7305-1680СевастьяноваЮ. А.SevastyanovaYu. A.

Севастьянова Юлия Александровна – специалист по биомедицинской статистике

Yulia A. Sevastianova – Biomedical Statistics Specialist

Yuliya.Sevastyanova@geropharm.comhttps://orcid.org/0000-0002-9342-3955ВасиленкоН. А.VasilenkoN. A.

Василенко Наталия Александровна – старший техник-лаборант

Natalia A. Vasilenko – Senior Laboratory Technician

n.vasilenko@qayar.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4087-8921АбрамоваА. А.AbramovaA. A.

Абрамова Анастасия Александровна – старший техник-лаборант

Anastasia A. Abramova – Senior Laboratory Technician

a.manina@qayar.ruООО «Квинта-Аналитика Ярославль»РоссияQuinta-Analytica Yaroslavl LLCRussian FederationООО «ГЕРОФАРМ»РоссияGEROFARM LLCRussian FederationООО «Квинта-Аналитика Ярославль»; ФГБОУ ВО «Ярославский государственный медицинский университет» Минздрава РоссииРоссияQuinta-Analytica Yaroslavl LLC; Yaroslavl State Medical UniversityRussian Federation2019030420194193101Copyright © Шитов Л.Н., Джурко Ю.А., Драй Р.В., Макаренко И.Е., Хохлов А.Л., Хозова Л.А., Афонькина О.В., Севастьянова Ю.А., Василенко Н.А., Абрамова А.А., 20192019Шитов Л.Н., Джурко Ю.А., Драй Р.В., Макаренко И.Е., Хохлов А.Л., Хозова Л.А., Афонькина О.В., Севастьянова Ю.А., Василенко Н.А., Абрамова А.А.Shitov L.N., Dzhurko Y.A., Drai R.V., Makarenko I.E., Khokhlov A.L., Khozova L.A., Afonkina O.V., Sevastyanova Y.A., Vasilenko N.A., Abramova A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.actabiomedica.ru/jour/article/view/1984Цель исследования

Цель исследования: адаптация методики ИФА для целей сравнительного фармакокинетического исследования препаратов инсулина гларгина, валидация методики и её практическая апробация в клиническом исследовании биосимилярности.

Материалы и методы

Материалы и методы. Измерения выполнены на автоматических иммуноферментных анализаторах Personal Lab (Adaltis S.r.l., Италия) с использованием тест-систем для измерения концентрации инсулина гларгина (Invitron Ltd., Великобритания); для коррекции на кросс-реактивность были измерены концентрации человеческого инсулина в исследуемых образцах; клиническая часть исследования выполнена на 42 пациентах мужского пола в возрасте 18–65 лет с сахарным диабетом 1-го типа. Дизайн исследования: двойное слепое рандомизированное двухпериодное клэмп-исследование в перекрёстных группах с отмывочным периодом 7–14 дней. Сравниваемые препараты: Инсулин Гларгин (гларгин), раствор для подкожного введения, 100 ЕД/мл (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия); Лантус® (гларгин), раствор для подкожного введения, 100 ЕД/мл («Санофи-Авентис Дойчланд ГмбХ», Германия).

Результаты

Результаты. На этапе адаптации была осуществлена модификация методики, рекомендованной производителем тест-систем. Результаты выполненной валидации модифицированной методики по всем параметрам, установленным регуляторными требованиями (селективность, специфичность, точность калибровочного графика, правильность и прецизионность внутри испытания и между испытаниями, эффект переноса предыдущей пробы, допустимость разведения, стабильность растворов, стабильность в биологической матрице, параллелизм), удовлетворяли критериям приемлемости. По данным анализа биологических образцов, полученных в клинической части исследования, рассчитан основной фармакокинетический параметр инсулинов длительного действия – AUCins. 0-τ ; продемонстрирована биосимилярность сравниваемых препаратов (точечная оценка для отношения геометрических средних составила 99 %. 90%-й доверительный интервал для AUCins.0-τ составил 81,02–120,62 %, что находится в рамках допустимого диапазона (80,00–125,00 %).

Aims

Aims: adaptation and validation of the ELISA method insulin glargine determination for the pharmacokinetic study, practical approval in the biosimilars clinical trial.

Materials and methods

Materials and methods. Serum insulin glargine determination was measured using a commercial ELISA kit. All tests were run on a Personal LAB machine (Adaltis S.r.l., Rome, Italy) with test systems for measuring the concentration of insulin glargine (Invitron Ltd., United Kingdom); human insulin concentrations were measured in the samples from the study for correction of cross-reactivity. Clinical part of this study included 42 male patients aged 18–65 with diabetes mellitus type 1. This was a double-blind, randomized, crossover clamp study with wash-out period of 7–14 days. Comparisons drugs: Insulin Glargine (glargine) solution for subcutaneous administration, 100 U/ml (GEROPHARM, Russia) and Lantus® (glargine) solution for subcutaneous administration, 100 U/ml (Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, Germany).

Results

Results. At the stage of the method adaptation the modification of original manufacturer’s method was performed; the full validation of modified analytical method for all parameters (selectivity, specificity, precision of calibration curves, intra- and inter-batch precision and accuracy, carry-over, dilution integrity, stability of solutions, stability in biologic matrix, parallelism) in accordance with regulatory authorities requirements has been done. The primary endpoint for long-acting insulins – AUCins.0-τ was calculated. Insulin Glargine and Lantus® are equivalent based on AUCins.0-τ data (point estimation for ratio of geometric means was 99 %, the confidence intervals for the ratio of the geometric mean for AUCins.0-τ was 81.02–120.62 %, that correspond to acceptance range 80.00–125.00 %).

инсулин гларгиниммуноферментный анализбиосимилярывалидацияinsulin glargineELISAbiosimilarvalidationReferencesДедов И.И., Шестакова М.В., Сунцов Ю.И., Петеркова В.А., Галстян Г.Р., Майоров А.Ю., и др. Результаты реализации подпрограммы «Сахарный диабет» Федеральной целевой программы «Предупреждение и борьба с социально значимыми заболеваниями 2007–2012 годы». Сахарный диабет. 2013; 16(2S): 1-48.Dedov II, Shestakova MV, Suntsov YuI, Peterkova VA, Galstyan GR, Mayorov AYu, et al. The results of the realization of subprogramme “Diabetes mellitus” of the Federal Target Program «Prevention and control of socially significant diseases in 2007–2012». Sakharnyy diabet. 2013; 16(2S): 1-48. (In Russ.)Доклиническая и клиническая разработка биоаналогичных (биоподобных) лекарственных препаратов, содержащих рекомбинантный инсулин и аналоги инсулина. В: Совет Евразийской экономической комиссии. Об утверждении правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза. Решение № 89 от 3 ноября 2016 года. URL: http://docs.cntd.ru/ document/456026116.Preclinical and clinical development of biosimilar medicinal agents containing recombinant insulin and insulin analogues. In: Sovet Evraziyskoy ekonomicheskoy komissii. Ob utverzhdenii pravil provedeniya issledovaniy biologicheskikh lekarstvennykh sredstv Evraziyskogo ekonomicheskogo soyuza. Reshenie № 89 ot 3 noyabrya 2016 goda. URL: http://docs.cntd.ru/ document/456026116. (In Russ.)Хохлов А.Л. (ред.). Теоретические и практические основы проведения исследований воспроизведенных лекарственных препаратов: монография. М.-Ярославль-Прага: ООО Фотолайф; 2017.Khokhlov AL. (ed.). Theoretical and practical basics of conducting the researches of generic drugs. M.-Yaroslavl-Praga: OOO Fotolayf; 2017. (In Russ.)Chow SC, Cheng B, Cosmatos D. On power and sample size calculation for QT studies with recording replicates at given time point. J Biopharmac Stat. 2008; 18(3): 483-493. doi: 10.1080/10543400801995452Chow SC, Cheng B, Cosmatos D. On power and sample size calculation for QT studies with recording replicates at given time point. J Biopharmac Stat. 2008; 18(3): 483-493. doi: 10.1080/10543400801995452Davies M, Dahl D, Heise T, Kiljanski J, Mathieu C. Introduction of biosimilar insulins in Europe. Diabet Med. 2017; 34(10): 1340- 1353. doi: 10.1111/dme.13400.Davies M, Dahl D, Heise T, Kiljanski J, Mathieu C. Introduction of biosimilar insulins in Europe. Diabet Med. 2017; 34(10): 1340-1353. doi: 10.1111/dme.13400.European Medical Agency. Guideline on non-clinical and clinical development of similar biological medicinal products containing recombinant human insulin and insulin analogues. Draft 2. 2014; 44(April): 1-12. URL: https://www.ema.europa. eu/documents/scientific-guideline/second-draft-guidelinenon-clinical-clinical-development-similar-biological-medicinalproducts_en.pdf.European Medical Agency. Guideline on non-clinical and clinical development of similar biological medicinal products containing recombinant human insulin and insulin analogues. Draft 2. 2014; 44(April): 1-12. URL: https://www.ema.europa.eu/documents/ scientific-guideline/second-draft-guideline-non-clinical-clinicaldevelopment-similar-biological-medicinal-products_en.pdf.European Medicines Agency. Abasaglar Insulin Glargine. EPAR Summary for the public; 2014. URL: http://www.ema. europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Summary_for_ the_public/human/002835/WC500175384.pdf.European Medicines Agency. Abasaglar Insulin Glargine. EPAR Summary for the public; 2014. URL: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Summary_for_ the_public/human/002835/WC500175384.pdf.Heise T, Zijlstra E, Nosek L, Heckermann S, Plum-Mörschel L, Forst T. Euglycaemic glucose clamp: what it can and cannot do, and how to do it. Diabet Obes Metabolism. 2016; 18(10): 962-972. doi:10.1111/dom.12703Heise T, Zijlstra E, Nosek L, Heckermann S, Plum-Mörschel L, Forst T. Euglycaemic glucose clamp: what it can and cannot do, and how to do it. Diabet Obes Metabolism. 2016; 18(10): 962-972. doi:10.1111/dom.12703Li YX, Ke Y, Li J, Li Y, Li R, Chen X, et al. Quantitation of insulin analogue glargine and its two metabolites M1 and M2 on Triple Quad™ 6500 and Triple TOF® 5600 LC-MS/MS systems in a dog toxicokinetics study. J Anal Bioanal Tech. 2013; S5: 004. doi: 10.4172/2155-9872.s5-004Li YX, Ke Y, Li J, Li Y, Li R, Chen X, et al. Quantitation of insulin analogue glargine and its two metabolites M1 and M2 on Triple Quad™ 6500 and Triple TOF® 5600 LC-MS/MS systems in a dog toxicokinetics study. J Anal Bioanal Tech. 2013; S5: 004. doi: 10.4172/2155-9872.s5-004Linnebjerg H, Lam EC, Seger ME, Coutant D, Chua L, Chong CL, et al. Comparison of the pharmacokinetics and pharmacodynamics of LY2963016 insulin glargine and European Unionand US-approved versions of Lantus insulin glargine in healthy subjects: Three randomized euglycemic clamp studies. Diabetes Care. 2015; 38(12): 2226-2233. doi: 10.2337/dc14-2623Linnebjerg H, Lam EC, Seger ME, Coutant D, Chua L, Chong CL, et al. Comparison of the pharmacokinetics and pharmacodynamics of LY2963016 insulin glargine and European Unionand US-approved versions of Lantus insulin glargine in healthy subjects: Three randomized euglycemic clamp studies. Diabetes Care. 2015; 38(12): 2226-2233. doi: 10.2337/dc14-2623McKeage K, Goa KL. Insulin glargine. Drugs. 2001; 61(11): 1599-1624. doi: 10.2165/00003495-200161110-00007McKeage K, Goa KL. Insulin glargine. Drugs. 2001; 61(11): 1599-1624. doi: 10.2165/00003495-200161110-00007Tibaldi JM. Evolution of insulin: from human to analog. Am J Med. 2014; 127 (10): S25-S38. doi: 10.1016/j.amjmed.2014.07.005Tibaldi JM. Evolution of insulin: from human to analog. Am J Med. 2014; 127 (10): S25-S38. doi: 10.1016/j.amjmed.2014.07.005Van Soest R, Li Y. Quantitation of insulin glargine in human plasma with a combination of immunocapture-based target enrichment and trap-and-elute microflow LC-MS/MS. Drug Discovery and Development. USA, Redwood City, CA: SCIEX; 2016. URL: https:// sciex.com/Documents/tech%20notes/Quantitation-of-InsulinGlargine-in-Human-Plasma-v2.pdf.Van Soest R, Li Y. Quantitation of insulin glargine in human plasma with a combination of immunocapture-based target enrichment and trap-and-elute microflow LC-MS/MS. Drug Discovery and Development. USA, Redwood City, CA: SCIEX; 2016. URL: https:// sciex.com/Documents/tech%20notes/Quantitation-of-InsulinGlargine-in-Human-Plasma-v2.pdf.Xu Y, Prohn M, Cai X, Crutchlow M, Shankar SS, Bateman K, et al. Direct comparison of radioimmunoassay and LC–MS/MS for PK assessment of insulin glargine in clinical development. Bioanalysis. 2014; 6(24): 3311-3323. doi: 10.4155/bio.14.219Xu Y, Prohn M, Cai X, Crutchlow M, Shankar SS, Bateman K, et al. Direct comparison of radioimmunoassay and LC–MS/MS for PK assessment of insulin glargine in clinical development. Bioanalysis. 2014; 6(24): 3311-3323. doi: 10.4155/bio.14.219

The authors declare that there are no conflicts of interest present.